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單細胞分離廣泛應(yīng)用于眾多研究領(lǐng)域
閱讀：790 發(fā)布時間：2021-11-29
單細胞分離對于很多應(yīng)用場景如，單細胞測序，單克隆培養(yǎng)等而言是關(guān)鍵的前處理步驟，殊不知單細胞分離的前處理步驟也有很多需要注意的地方。下面我們就來了解一下，為了提高單細胞分離的效率和效果，都有哪些小竅門。
單細胞分離用于區(qū)分碎片、死細胞和活細胞，然后可以根據(jù)操作流程分離單個活細胞，為了去除細胞結(jié)團，在染色之后可以用40um左右的細胞篩網(wǎng)過濾細胞，盡量保證在上樣的時候樣本都是單個細胞。
作為對照，我們采用細胞密度進行手動有限稀釋法鋪板。然后，用顯微鏡在明場下觀察每個孔的細胞（或者微球）的數(shù)量，同樣的實驗持續(xù)7天，每天做一組對比實驗，取平均值，通過統(tǒng)計孔板中單細胞、兩個細胞和空孔的數(shù)量來衡量儀器的分選效率，可通過差速離心或密度梯度離心和過濾的方法，根據(jù)大小、形狀和密度對細胞進行人工分離。
例如，通過各種密度梯度離心，可以從外周血或骨髓中分離出單核細胞，使用熒光染料可以從死細胞或凋亡細胞中標(biāo)記和分離活細胞，富集細胞亞群或稀有細胞類型時，可將標(biāo)記抗體基于磁珠的分離方法相結(jié)合進行陽性/陰性篩選。多種因素將影響方法的選擇，包括樣本類型、可用抗體種類和實驗設(shè)計。
它可以快速識別可能會使下游步驟變得復(fù)雜的碎片、細胞雙聯(lián)體和細胞聚集物，更重要的是，準(zhǔn)確的細胞計數(shù)對于實現(xiàn)單細胞分離過程的目標(biāo)細胞通量至關(guān)重要，可以使用顯微鏡和血細胞計數(shù)器進行手動細胞計數(shù)，也可以使用自動化系統(tǒng)進行準(zhǔn)確的細胞計數(shù)，采集細胞懸液的明場圖像，根據(jù)細胞特征（例如大小、亮度和圓度）生成直方圖進行更詳細的檢查。
在以上步驟完結(jié)之后，我們就能得到一個好的單細胞懸液了。最后我們用Namocell單細胞分離儀完成后面的單細胞分離工作，最快可以在1min以內(nèi)完成96孔板的鋪板，6min以內(nèi)完成384孔板的鋪板，并且整版單細胞效率高達90%左右。
