DH10B 電擊感受態(tài)細胞
DH10B Electroporation-Competent Cell

DH10B 電擊感受態(tài)細胞基因型：

F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 (ara, leu)7697 galE15 g alK λ- rpsL nupG

DH10B 電擊感受態(tài)細胞簡要說明：

 High5TM 系列 DH10B 感受態(tài)細胞只能用于電擊轉化而不能用于熱激轉化。
 DH10B 菌株來源于 MC1061 菌株，mcrA、mcrBC 及 mrr 突變使 DH10B 菌株適合于克隆富 含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA (無論真核生物還是原核生物的基因組 DNA 都能被高效的轉入 DH10B 中)。recA1 和 endA1 的突變有利于插入 DNA 的穩(wěn)定和高純度質粒 DNA 的提取。 φ80dlacZ?M15 標記的存在使 DH10B 可用于藍白斑篩選，rpsL 賦予其鏈霉素抗High5TM 系列 DH10B 感受態(tài)細胞適用于大質粒的構建或者各種文庫構建。High5TM 系 列 DH10B 感 受 態(tài) 細 胞 經 特 殊 工 藝 制 作 ， 經 pUC19 質 粒 檢 測 ， 轉 化 效 率>1010cfu/μg。
   DH10B 電擊感受態(tài)細胞操作說明：
1. 0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上 5 分鐘，待其瀝干水分，正置 5 分鐘，使
乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯蓋，
冰中靜置 5 分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的  High5TM 系列 DH10B 感受態(tài)細胞放入冰浴中融化，加入 1 μl 目的 DNA (質 ?；蜻B接產物)并用手 EP 管底輕輕混勻立即插入冰中。
A. 測定轉化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的對照質粒 pUC19；
B. 對于連接產物，請用乙醇沉淀 DNA 后適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重 懸，保證 DNA 濃度不超過 100 ng/μl。
3. 用 200 μl 槍頭將感受態(tài)-質?；旌衔锟焖僖频诫姄舯?，避免產生氣泡，蓋上杯蓋。
4. 啟動電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.4 kV (此為 BioRad 電轉儀推薦參數，使用者也 可按所用電轉儀推薦的參數操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中。
5. 向電擊杯中加入 700 μl 不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 S.O.C.，混勻后轉移到空 EP 管中，37℃，200 rpm
復蘇 60 分鐘。
6. 5000rpm 離心一分鐘收菌，重懸后取 100-200 μl 涂布到含相應抗生素的 2YT 或 LB 培養(yǎng)基上。將平 板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放 37℃培養(yǎng)至少 13h。
  DH10B 電擊感受態(tài)細胞注意事項：

1.  加入質粒時體積不應大于感受態(tài)體積的 1/10。
2.  當質粒不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時，轉化效率急劇下降。
3.    若轉化大質?；蛳氆@得較高轉化效率，推薦使用高純質粒提取試劑盒提取質粒。質粒增大一倍，轉 化效率下降一個數量級。
4. 對于連接產物轉化，轉化前用乙醇沉淀 DNA 后適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸產物，保證 DNA 濃度不超過 100 ng/μl。過高濃度連接產物或過大體積連接產物會降低轉化 效率，增加打火的風險。
5.  混入質粒時應輕柔操作。
6.  轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。
 

  DH10B 電擊感受態(tài)細胞其他推薦：
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