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人Ⅲ型原膠原N端前肽(PⅢNP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)

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  人Ⅲ型原膠原N端前肽(PⅢNP)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

  BS-1708 人Ⅲ型原膠原N端前肽(PⅢNP)ELISA試劑盒

  一、試劑盒簡(jiǎn)介

  人Ⅲ型原膠原N端前肽(PⅢNP)ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)原理,用于定量檢測(cè)血清、血漿及相關(guān)液體樣本中PⅢNP的含量?。PⅢNP是III型膠原蛋白合成過(guò)程中產(chǎn)生的肽段,其血清水平可作為肝臟纖維化和肝硬化的指標(biāo)?。

  二、試劑盒組成

  試劑盒通常包含以下組分(具體以實(shí)際包裝為準(zhǔn)):

  酶標(biāo)包被板:1×48孔或1×96孔(預(yù)包被捕獲抗體)

  標(biāo)準(zhǔn)品:通常為凍干粉或液體,濃度范圍常見(jiàn)為62.5-4000pg/mL?

  樣品稀釋液:3ml×1瓶或6ml×1瓶

  檢測(cè)溶液A(生物素標(biāo)記抗體)和檢測(cè)溶液B(HRP標(biāo)記物)

  TMB底物溶液和終止液

  濃縮洗滌液(20-30倍)

  封板膜和說(shuō)明書(shū)?

  三、樣本處理要求

  血清樣本?:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘,收集上清。避免溶血和反復(fù)凍融?。

  血漿樣本?:使用EDTA、檸檬酸鈉或肝素抗凝,采集后30分鐘內(nèi)2-8℃離心(1000×g,15分鐘)?。

  組織勻漿?:按1:9重量體積比加入PBS勻漿,5000×g離心5-10分鐘取上清?。

  細(xì)胞培養(yǎng)上清?:直接1000×g離心20分鐘收集?。

  注意:NaN3會(huì)抑制HRP活性,含NaN3的樣品不能檢測(cè)?。

  四、實(shí)驗(yàn)操作步驟

  試劑準(zhǔn)備?:

  使用前將所有試劑平衡至室溫(18-25℃)

  按需稀釋濃縮洗滌液(如20ml濃縮液加580ml蒸餾水)?

  標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋(常見(jiàn)7-8個(gè)濃度點(diǎn))?

  加樣與孵育?:

  分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔

  加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品100μL/孔,37℃孵育30-90分鐘?

  洗板5次(每次靜置30秒),拍干

  檢測(cè)抗體孵育?:

  加入生物素標(biāo)記抗體100μL/孔,37℃孵育60分鐘?

  再次洗板5次

  顯色與終止?:

  加入TMB底物90μL/孔,37℃避光顯色15分鐘

  加入終止液50μL/孔,立即測(cè)定?

  結(jié)果讀取?:

  使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)讀取OD值

  以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

  通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品濃度?

  五、注意事項(xiàng)

  操作規(guī)范?:

  不同批次試劑不可混用

  避免底物接觸金屬器具

  嚴(yán)格控溫和時(shí)間,建議做雙復(fù)孔?

  保存條件?:

  未開(kāi)封試劑盒:部分組分-20℃保存,部分2-8℃保存(詳見(jiàn)標(biāo)簽)?

  開(kāi)封后:酶標(biāo)板加干燥劑密封保存于-20℃,剩余試劑按標(biāo)簽溫度保存?

  質(zhì)量控制?:

  板內(nèi)變異系數(shù)應(yīng)<10%,板間變異系數(shù)<10%?

  回收率應(yīng)在85%-115%范圍內(nèi)?

  安全事項(xiàng)?:

  TMB底物有毒性,終止液有腐蝕性,需防護(hù)?

  避免直接接觸試劑,操作時(shí)穿戴防護(hù)裝備?

  六、技術(shù)參數(shù)

  檢測(cè)范圍?:常見(jiàn)62.5-4000pg/mL(不同品牌有差異)?

  靈敏度?:檢測(cè)限通常≤25pg/mL?

  精密度?:批內(nèi)CV≤10%,批間CV≤15%?

  有效期?:一般為6-12個(gè)月(以包裝標(biāo)簽為準(zhǔn))?

  天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作,共創(chuàng)美好的未來(lái)。

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