Jackson二抗選擇指南

美國(guó)Jackson ImmunoResearch Inc.為著名的二抗生產(chǎn)商，成立于1982年，專(zhuān)業(yè)致力于親和純化的二抗和純化的免疫球蛋白的生產(chǎn)及偶聯(lián)，30余年的專(zhuān)注，30余年的發(fā)展，Jackson的二抗以種類(lèi)豐富（物種齊全，標(biāo)記多樣，應(yīng)用廣泛）、性?xún)r(jià)比高、供貨迅捷而深受科研學(xué)者和工業(yè)客戶(hù)的青睞。

上?；菡\(chéng)生物不僅堅(jiān)持提供傳統(tǒng)標(biāo)記的二抗（如酶標(biāo)記，AMCA，F(xiàn)ITC，羅丹明，Cy系列等），而且始終與前沿的染料生產(chǎn)商合作，供應(yīng)新型染料標(biāo)記的二抗（如Alexa Fluor?，DyLight 405）。 

廣泛的應(yīng)用范圍

二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，上面通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。Jackson ImmunoResearch二抗可用于以下領(lǐng)域：

免疫熒光

免疫組織化學(xué)

免疫細(xì)胞化學(xué)

Western blotting

流式細(xì)胞術(shù)

原位雜交

電子顯微鏡

超級(jí)解析度顯微鏡

雙光子顯微鏡

ELISA

齊全的二抗品種

• Fab片段抗體是用木瓜蛋白酶消化IgG后得到的。這些抗體只含有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。它們用來(lái)封閉內(nèi)源性的免疫球蛋白，或者在使用相同物種來(lái)源的一抗作多標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)中，用于封閉暴露的免疫球蛋白。

如何選擇Jackson二抗？

Step1：三種形式親和純化的二抗的選擇——Whole IgG 、F(ab')2 片段或Fab片段；

Step2： 確定一抗的物種來(lái)源，抗體是根據(jù)一抗的物種來(lái)源的字母表順序排列。比如，如果一抗是小鼠來(lái)源的，就找“anti-mouse”；

Step3：選擇二抗的物種來(lái)源；

Step4：選擇二抗的特異性。 注意：不同來(lái)源的免疫球蛋白含有相似的結(jié)構(gòu)，抗體的生成過(guò)程也相似?？挂粋€(gè)物種的抗體可能與其他物種發(fā)生交叉反應(yīng)，除非事先特殊處理過(guò)－這時(shí)會(huì)標(biāo)有“(min X …Sr Prot)。下面詞語(yǔ)的解釋將對(duì)選擇合適的抗體有所幫助：

• Anti-IgG (H+L)

這類(lèi)抗體和IgG分子的重鏈和輕鏈都可以反應(yīng)，比如，和IgG分子的Fc，F(xiàn)(ab’)2/Fab部分。Anti-IgG (H+L)抗體也可以和其他的免疫球蛋白家族反應(yīng)（比如IgM和IgA），因?yàn)樗械拿庖咔虻鞍锥加邢嗤妮p鏈（κ鏈，或者λ鏈）。Anti-IgG (H+L)抗體比只抗片段的抗體識(shí)別更多的抗原表位。

• Anti-IgG，F(xiàn)c fragment specific

這類(lèi)抗體和IgG重鏈的Fc部分反應(yīng)。它們通過(guò)了ELISA檢測(cè)，和/或針對(duì)Fab片段吸附的測(cè)試。某些情況下，這類(lèi)抗體需要額外檢測(cè)和處理來(lái)降低和IgM或IgA的交叉反應(yīng)。在這種情況下（anti-human,-mouse,-rat），它們會(huì)被描述為“Anti-IgG, Fcγfragment specific”。

• Anti-IgG，F(xiàn)cγ Subclass specific

這類(lèi)抗體分別和不同的小鼠IgG亞型重鏈的Fc部分反應(yīng)。它們經(jīng)過(guò)ELISA和/或針對(duì)Fab片段、IgM和其他小鼠IgG亞型的吸附測(cè)試。

• Anti-IgG，F(xiàn)(ab’)2 fragment specific

這類(lèi)抗體和IgG的F(ab’)2/Fab部分反應(yīng)。它們經(jīng)過(guò)了ELISA和/或Fc片段的吸附檢測(cè)。因?yàn)樗鼈兪呛洼p鏈反應(yīng)，它們同時(shí)也和具有相同輕鏈的其他種類(lèi)的免疫球蛋白反應(yīng)（如IgM和IgA）。

• (min X…Sr Prot)

這類(lèi)抗體經(jīng)過(guò)了檢測(cè)，以及針對(duì)IgG和圓括號(hào)中的物種的血清蛋白的吸附處理。當(dāng)其他物種免疫球蛋白的出現(xiàn)可能導(dǎo)致交叉反應(yīng)時(shí)，推薦使用這類(lèi)抗體。但是，當(dāng)要選擇經(jīng)過(guò)針對(duì)相近物種吸附處理的抗體時(shí)，要特別注意，因?yàn)樗鼈兡茏R(shí)別的表位數(shù)量大大減小了，可能識(shí)別單抗的能力很弱。

• ML （Multiple Labeling）

有些抗體標(biāo)明了ML，來(lái)強(qiáng)調(diào)它們除了可以用于單標(biāo)，還可用于多標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。

Step5：選擇需要的探針；

• 熒光團(tuán)：傳統(tǒng)與新型染料可選，包括Alexa Fluor? Fluorescent Dyes 、花青染料(Cy2, Cy3, and Cy5)、DyLight 405、Aminomethylcoumarin Acetate (AMCA)、luorescein Isothiocyanate (FITC) 、Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate（TRITC）, Rhodamine Red-X (RRX), Texas Red (TR)等。

Table 1 Approximate peak wavelengths of excitation and emission for all fluorophore-conjugated.

熒光團(tuán)的選擇依賴(lài)于：

A.儀器。比如，光源，濾片，檢測(cè)系統(tǒng)。

B.多標(biāo)記中對(duì)色彩區(qū)分程度的要求。比如，為更好的區(qū)分Alexa Fluor? 488，選擇短發(fā)射波長(zhǎng)熒光素DyLight 405或長(zhǎng)發(fā)射波長(zhǎng)熒光素羅丹明紅-X (RRX)、Alexa Fluor? 594或Alexa Fluor? 647。

C.要求的靈敏度。比如，Alexa Fluor? 488較之FITC更亮。

• Biotin-SP (長(zhǎng)連接的)

Biotin-SP是Jackson用來(lái)命名和其耦聯(lián)蛋白之間具有長(zhǎng)連接的生物素。在使用Biotin-SP耦聯(lián)的抗體作酶免疫實(shí)驗(yàn)時(shí)，相比沒(méi)有長(zhǎng)連接的生物素標(biāo)記的抗體，靈敏度有很明顯的提高。

• 酶

Jackson提供兩種不同的酶耦聯(lián)物：辣根過(guò)氧化物酶（HRP）和堿性磷酸脂酶。

HRP耦聯(lián)物是通過(guò)Nakane和Kawaoi過(guò)程制備的。過(guò)氧化物酶耦聯(lián)物廣泛應(yīng)用于免疫組化，Western blotting和ELISA中。堿性磷酸脂酶耦聯(lián)物是通過(guò)優(yōu)化過(guò)的Avremeas方法制備的復(fù)合物，具有高有效濃度和高分子量。它們比較靈敏，適合于固相的免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)比如ELISA和Western blotting。

Figure 2 A Product with the code number 115-096-072 should be described as above.