蛋白純化要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異，利用各種蛋白間的相似性來(lái)除去非蛋白物質(zhì)的污染，而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來(lái)。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學(xué)活性都會(huì)有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來(lái)得到重組蛋白。
 

　　凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)采用高度靈活配置的模塊化設(shè)計(jì)，具有許多優(yōu)點(diǎn)來(lái)進(jìn)行快速、靈活、穩(wěn)定的純化。硬件的所有閥門、檢測(cè)器和層析柱均面向操作者安裝，方便科研人員清楚、直觀地了解各個(gè)模塊之間的關(guān)系和樣品以及緩沖液的流路。將樣品環(huán)上樣改進(jìn)為直接上樣，入口可實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)和層析柱的自動(dòng)清洗?？蒲腥藛T從一個(gè)純化任務(wù)轉(zhuǎn)向另一個(gè)純化任務(wù)僅僅需要幾分鐘，在保持準(zhǔn)確性和確保重復(fù)性的同時(shí)，大大地節(jié)省制備時(shí)間。

　　凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)的樣品制備：

　　1.樣品必須澄清，沒(méi)有顆粒狀物，否則容易堵塞層析柱。

　　2.樣品緩沖液：樣品緩沖液的pH、離子強(qiáng)度和組成不會(huì)顯著性影響結(jié)果的分辨率，只要這些參數(shù)不影響被分離蛋白質(zhì)的大小和穩(wěn)定性，也不超出填料的穩(wěn)定范圍。

　　3.樣品濃度：凝膠過(guò)濾分離效果與樣品量無(wú)關(guān)，因此與樣品濃度也沒(méi)有關(guān)系。通常蛋白濃度不要超過(guò)60mg/mL。樣品的溶解性和粘度會(huì)限制樣品濃度，關(guān)鍵在于樣品相對(duì)于流動(dòng)相的粘度，太高的樣品粘度會(huì)引起分離的不穩(wěn)定性和不規(guī)則的流動(dòng)形式，會(huì)導(dǎo)致非常寬和成串的峰形，反壓也會(huì)增加，因此對(duì)于粘度大的樣品需要進(jìn)行稀釋。

　　樣品體積：在凝膠過(guò)濾中，這是重要的參數(shù)之一。一般推薦上樣的體積在1-30%之間，可以做梯度實(shí)驗(yàn)，確定較佳的上樣體積。