目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1394MARC145/Gal-10猴胎腎細(xì)胞系
供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
---|
來源與改造機(jī)制
形態(tài)與生長特征
功能特性
Gal-10 表達(dá)與定位:Gal-10 主要定位于細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞膜表面,表達(dá)量較親本 MARC145 細(xì)胞高 12-18 倍(qPCR 與 ELISA 檢測),培養(yǎng)液中濃度可達(dá) 60ng/mL,通過旁分泌效應(yīng)增強(qiáng)周圍細(xì)胞的病毒敏感性。
病毒敏感性:對 PRRSV 的感染效率達(dá) 96% 以上(流式細(xì)胞術(shù)檢測病毒 N 蛋白),感染后 20 小時(shí)即可檢測到病毒復(fù)制,48 小時(shí)病毒滴度達(dá) 10?-10? TCID??/mL,較 MARC145 細(xì)胞高 1.5-2 個(gè)數(shù)量級;對 PRRSV 的高致病性毒株(如 HP-PRRSV)敏感性突出,檢出率達(dá) 95%,顯著優(yōu)于其他猴源細(xì)胞系。
交叉反應(yīng)性:對豬圓環(huán)病毒 2 型(PCV2)也具有一定敏感性,可支持其低水平復(fù)制(滴度 10? TCID??/mL),為 PRRSV 與 PCV2 共感染研究提供模型。
PRRSV 入侵機(jī)制研究
病毒吸附與內(nèi)吞解析:利用 MARC145/Gal-10 的 Gal-10 高表達(dá)特性,證實(shí)其通過橋接 PRRSV 包膜 GP4 蛋白與宿主細(xì)胞表面神經(jīng)jie苷脂 GM1,促進(jìn)病毒的網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用。通過特異性抗體阻斷 Gal-10 后,病毒內(nèi)吞率下降 80%,明確其為 PRRSV 入侵的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。
宿主因子協(xié)同作用:該細(xì)胞系可用于篩選與 Gal-10 相互作用的宿主蛋白,已鑒定出膜聯(lián)蛋白 A2(Annexin A2)作為共受體參與病毒內(nèi)化,為 PRRSV 感染的多分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)研究提供新線索。
PRRSV 疫苗研發(fā)與優(yōu)化
高效疫苗株培養(yǎng):因病毒復(fù)制效率高,可縮短 PRRSV 疫苗株的培養(yǎng)周期,較傳統(tǒng) MARC145 細(xì)胞生產(chǎn)工藝提升 40% 產(chǎn)量。例如,在該細(xì)胞系中培養(yǎng)的 PRRSV 弱毒疫苗株,病毒滴度穩(wěn)定在 10?.? TCID??/mL,免疫仔豬后產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)較常規(guī)疫苗高 1 個(gè)數(shù)量級。
新型疫苗載體評估:可作為重組腺病毒載體表達(dá) PRRSV GP5 蛋白的宿主細(xì)胞,表達(dá)量達(dá) 2.5μg/10?細(xì)胞,免疫小鼠后誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答(IFN-γ 分泌)較 MARC145 細(xì)胞高 50%,為載體疫苗研發(fā)提供高效表達(dá)平臺。
抗病du藥物篩選與機(jī)制驗(yàn)證
靶向 Gal-10 的藥物篩選:基于其特性建立高通量篩選模型,已發(fā)現(xiàn)天然產(chǎn)物沒食子酸乙酯可特異性抑制 Gal-10 的凝集素活性,使 PRRSV 感染率下降 85%,EC??=0.8μM,且對細(xì)胞毒性低(CC??>60μM),為新型抗病du藥物開發(fā)提供先導(dǎo)化合物。
藥物協(xié)同效應(yīng)評估:可用于檢測不同作用機(jī)制藥物的協(xié)同效果,例如,沒食子酸乙酯與利ba韋林聯(lián)合使用時(shí),對 PRRSV 的抑制率達(dá) 95%,協(xié)同指數(shù)(CI)=0.3,證實(shí)二者具有顯著協(xié)同作用。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:DMEM 高糖培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4,可加入 1mM 丙酮酸鈉提升細(xì)胞代謝效率。
傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 80%-90% 時(shí),棄舊培養(yǎng)基,PBS 洗滌 2 次,加入細(xì)胞解離液,37℃孵育 2-3 分鐘至細(xì)胞脫落,加入含血清的培養(yǎng)基終止消化,按 1:4 比例接種至新培養(yǎng)瓶,避免細(xì)胞密度過高導(dǎo)致 Gal-10 表達(dá)降低。
凍存保護(hù):取對數(shù)生長期細(xì)胞,用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基重懸至密度 5×10?個(gè) /mL,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇后傳代 2 次,待 Gal-10 表達(dá)穩(wěn)定后用于實(shí)驗(yàn)。
病毒感染與檢測
PRRSV 接種:細(xì)胞以 1×10?個(gè) / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時(shí)至融合度 70%,用無血清培養(yǎng)基稀釋病毒(MOI=0.05),37℃吸附 1 小時(shí),換含 2% 血清的維持液,48 小時(shí)后通過 qPCR 檢測病毒 RNA 或間接免疫熒光檢測 N 蛋白,計(jì)算病毒滴度。
藥物篩選操作:感染前 2 小時(shí)加入待篩藥物,感染后繼續(xù)培養(yǎng) 48 小時(shí),通過 CCK-8 檢測細(xì)胞活力,同時(shí)檢測病毒產(chǎn)量,計(jì)算抑制率與選擇指數(shù)(SI=CC??/EC??)。
優(yōu)勢:
PRRSV 敏感性突出:尤其對高致病性毒株的感染效率與復(fù)制能力顯著優(yōu)于同類細(xì)胞系,適合烈性 PRRSV 研究。
功能靶向性強(qiáng):通過 Gal-10 過表達(dá)可特異性解析該分子在病毒感染中的作用,實(shí)驗(yàn)干擾因素少。
生產(chǎn)效率高:疫苗株培養(yǎng)周期短、產(chǎn)量高,符合工業(yè)化生產(chǎn)需求。
局限性:
物種差異影響:猴源 Gal-10 與人、豬源 Gal-10 的同源性分別為 88%、82%,部分研究結(jié)果需在豬源細(xì)胞中驗(yàn)證。
病毒譜較窄:對非 PRRSV 的敏感性提升有限,應(yīng)用范圍受限于特定病毒研究。
傳代依賴性:傳代超過 60 代后,Gal-10 表達(dá)量下降約 20%,需定期復(fù)蘇早期凍存細(xì)胞。
以上信息僅供參考,詳細(xì)信息請聯(lián)系我們。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)