溶血性鏈球菌實時熒光檢測系統(tǒng)

Real-time fluorescence detection system for hemolytic streptococcus

2.1產(chǎn)品簡介

溶血性鏈球菌實時熒光檢測系統(tǒng)是指通過熒光染料或熒光標記的 特異性探針,對PCR產(chǎn)物進行標記跟蹤，實時監(jiān)測反應(yīng)過程的儀 器。結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進行定性和定量分析，計算待測 樣品模板的初始濃度。在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒 光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程。后通過標準曲線對未知模 板進行定量分析,包括TaqMan熒光探針和SYBR熒光染料。PCR 能對特定基因或物種的豐度進行相對定量，比較不同處理或樣品間 的差異，如基因拷貝數(shù)、表達量來硏究基因表達對處理的響應(yīng)， 同時可以獲得PCR擴增效率等信息.

產(chǎn)品功能

溶血性鏈球菌實時熒光檢測系統(tǒng)是特異性靶基因檢測與定量的一體化平 臺?？焖傩蛯崟r定量PCR儀將PCR熱循環(huán)，熒光檢測和各種應(yīng)用分 析軟件結(jié)合在一起,可以動態(tài)觀察PCR每一循環(huán)各反應(yīng)管中PCR擴 增產(chǎn)物逐漸增加的情況。PCR實驗結(jié)束后可以馬上得到定量結(jié)果, 無需凝膠電泳分析，無需純化PCR產(chǎn)物，無需進行任何實驗操作。

2.2試劑介紹

技術(shù)特點：

◆準確可靠，臨床雙盲對照試驗>1000例，結(jié)果與金標準測序法比對，結(jié)果*性大于99%。

◆高靈敏：可檢測低至10ng的人基因組DNA。

◆快速：整個檢測流程只需3小時。

◆產(chǎn)品僅用于科研簡便：試劑盒提供預(yù)混好的試劑，使體系配置操作簡便。

◆防污染

◆高特異性：雙重特異性組成，保證檢測結(jié)果的特異性和準確性引物與DNA互補鏈結(jié)合必需* 配對，才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產(chǎn)物配對，在延伸中產(chǎn)生熒光。

產(chǎn)品及特點：

◆ 即開即用，用戶只需要提供伴放線放線桿菌樣品。

◆ 根據(jù)伴放線放線桿菌保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。

◆ 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。

◆ 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。

◆ 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)

◆ 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

◆ 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

◆ 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭，下同)。

◆ 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

◆ 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

◆ 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

◆ 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

◆ 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC(樣品制備陽性對照)，一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

◆ 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系，在樣品制備室進行)

◆ 如果只做1次重復(fù)，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

產(chǎn)品主要參數(shù)

主要特點：

可檢測固態(tài)、液態(tài)、表面、膏狀、漿狀樣本;

樣本在檢測時無需任何的前處理過程，直接丟入檢測瓶即可;

可自動控制孵育溫度和孵育時間

檢測樣本只需1ml/1g;同一溫度下可同時檢測8個樣品;

靈敏度高達可檢測到1目標微生物;特異性高達99.999%;

獨立、持續(xù)的檢測并記錄瓶中的微生物數(shù)量(CFU)

簡單三個操作步驟，傻瓜型，無需專業(yè)操作人員;

儀器便攜式，可隨時隨地進行檢測、100%定量分析，并可直接連接電腦出定量分析檢測報告。

RVL微生物檢測瓶

檢測范圍：

活細菌總數(shù)

大腸菌群/大腸桿菌/大腸桿菌O157, O111, O104...等

腸道桿菌科

金黃色葡萄球菌

銅綠假單胞菌;綠膿桿菌

沙門氏菌

李斯特菌

腸球菌

酵母菌

應(yīng)用范圍：

衛(wèi)生控制：

-食品(HACCP)

-廚房、工具、表面(HACCP)

-水質(zhì)

-(CDC)疾病控制、進出口檢驗檢疫

-藥品及 化妝品

與我們的生活息息相關(guān)，例如：

咖啡館、餐廳

水源檢測、制水廠

分析實驗室和HACCP診斷

農(nóng)產(chǎn)品及相關(guān)加工公司

藥廠、藥房、化妝品廠

環(huán)境監(jiān)測機構(gòu)

水配送公司

消費者保護團體、工商管理機構(gòu)

室內(nèi)空調(diào)調(diào)節(jié)公司

集傳統(tǒng)檢驗方法優(yōu)點于一身:

-培養(yǎng)皿法

-酶法(β-葡萄糖苷酸酶分析)

-免疫法(抗原搜尋)

-基因法(基因搜尋)

檢驗樣本無需任何前處理

-液態(tài)樣本，固態(tài)樣本和表面樣本均無需前處理

定性和定量分析

-搭配檢測機：100%的定量分析

-肉眼判讀：定性或半定量分析

簡單便捷

-簡單的三個步驟得到檢測結(jié)果

檢驗迅速

-是傳統(tǒng)檢驗方法速度的2～5倍

高靈敏性

-可以檢測到1目標微生物(理論極值)

高特異性

-特異性高達99.999%(理論極值)

檢測瓶就是實驗室

-微生物檢測瓶隨時可用

-未受過嚴格專業(yè)訓(xùn)練的檢測人員也可隨時隨地進行檢測

使用后安全丟棄

-和過期藥物同樣處理

微生物檢測瓶尤其能應(yīng)用于軍事、大型展會等等的食品快速檢測

(微生物快速檢測)

RVL微生物快速檢測瓶

微生物快速檢測儀RVLM :

-簡單、便捷，100%定量分析

-在同一溫度下可容納8個樣品。

-可自動控制孵育溫度和孵育時間

-獨立、持續(xù)的檢測并記錄瓶中的微生物數(shù)量(CFU)

使用后無菌處理

-按下RVL微生物檢測瓶的瓶蓋上方

-放心安全丟棄(與過期藥物同樣處理)

若沒有RVLM微生物檢測儀：

-充分溶解混合后，放入恒溫器孵育

(在適當(dāng)溫度下孵育適當(dāng)時間，請查上表)

-肉眼判讀定性或半定量分析結(jié)果

以大腸菌群為例：

若菌落數(shù)>108CFU/ml：2小時內(nèi)顏色即變成黃色;

若菌落數(shù)<102CFU/ml：14小時內(nèi)顏色不會變成黃色;

若菌落不存在：18小時后顏色仍保持開始顏色

或其他中間色(不變成黃色)

簡單三個步驟得到100%定量檢測結(jié)果：

一步：放入樣本

-打開瓶蓋，加入11ml無菌水

-放入液態(tài)(固態(tài)/表面)樣本0.1~1.0ml(0.1~1.0g)

-蓋緊瓶蓋

第二步：搖動瓶子直到溶劑充分溶解或混合

(充分溶解或混合如右圖所示)

-若使用振蕩器，需時20秒左右;

或用手用力搖，需時2~3分鐘左右。

第三步：在適當(dāng)時間判讀結(jié)果(請查左表)

-使用RVLM微生物檢測儀：

-充分溶解混合后立即放入檢測儀

-得到100%定量分析結(jié)果