紫外分光度法進(jìn)行蛋白定量的實(shí)驗(yàn)方法

紫外分光度法進(jìn)行蛋白定量的實(shí)驗(yàn)方法

蛋白定量是蛋白質(zhì)檢測(cè)過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)，檢測(cè)的方法有很多，有Bradford檢測(cè)法、Bradford斑點(diǎn)試驗(yàn)法、Coomassie 斑點(diǎn)試驗(yàn)法、紫外分光度檢測(cè)法。其中、紫外分光度法是蛋白質(zhì)定量方法中比較快的一種方法。

一、紫外分光光度法進(jìn)行蛋白定量的檢測(cè)原理：

由于蛋白質(zhì)分子對(duì)于不同光度波段的吸光率也有所不同，所以紫外分光度檢測(cè)法主要通過(guò)光系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)蛋白分子的吸光率，從而確定蛋白質(zhì)的濃度進(jìn)行的蛋白定量。比如205nm的光波波長(zhǎng)主要吸光為肽鏈分子。280nm波長(zhǎng)下色氨酸與酪氨酸吸光率則這兩種分子以為主。
 
二、蛋白定量中蛋白質(zhì)溶液濃度的確定
1、純蛋白質(zhì)溶液：
a.在濾光波長(zhǎng)為280nm的環(huán)境下對(duì)比其吸光率。
b.其中的抗體和BSA，估算公式為：蛋白質(zhì) A280 (1mg/ml)IgG =1.35； IgM=1.2； BSA=0.7。（單位/吸光率約等于1mg/ml） 

2、蛋白定量中核苷酸類的蛋白溶液濃度測(cè)定： 
a.在280nm和260nm或205nm光波長(zhǎng)環(huán)境下對(duì)照其吸光率；
b.蛋白質(zhì)濃度估算公式：
280nm波長(zhǎng)：蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）=(1.55×A280 )-(0.76×A260 )
208nm波長(zhǎng)：蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）= A205 /(27 + 120 A280/ A205 )

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