臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)

 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSCs）是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細(xì)胞，廣泛應(yīng)用于組織工程，細(xì)胞治療和基因治療。 HyCyte®臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞取自滿月自然分娩的胎兒臍帶，傳代擴(kuò)增至第二代凍存。本產(chǎn)品經(jīng)生物安全檢測(cè)，無(wú)細(xì)菌、真菌、霉菌、支原體和病毒污染，表達(dá)多種人源間質(zhì)干細(xì)胞特異性標(biāo)記，具有良好的增殖和分化潛能，可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

  驗(yàn)證HyCyte®人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)于人臍帶華通質(zhì)膠中提取間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)的能力。人體臍帶橫截面示意圖，臍帶內(nèi)層覆蓋，外層為臍上皮，三個(gè)臍血管嵌在華通質(zhì)膠中。華通質(zhì)膠是一種凝膠狀結(jié)締組織，由富含糖胺聚糖（主要是透明質(zhì)酸）、膠原纖維和肌成纖維細(xì)胞以及偶爾存在的肥大細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)組成。華通質(zhì)膠基質(zhì)細(xì)胞在血管周圍附近最為豐富，在血管間華通質(zhì)膠中變少。

二、實(shí)驗(yàn)試劑和實(shí)驗(yàn)耗材

試劑：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（Cat.No.: UCHX-G101）

間充質(zhì)干細(xì)胞 其他配套試劑均為HyCyte

耗材：T175培養(yǎng)瓶

三、實(shí)驗(yàn)步驟

(1)用無(wú)菌輔料鑷從轉(zhuǎn)運(yùn)瓶中取出臍帶，置于1×PBS培養(yǎng)皿中。

(2)清洗臍帶，轉(zhuǎn)移至另一1×PBS培養(yǎng)皿中，重復(fù) 3次。

(3)將臍帶剪成4 cm左右小段，再清洗3次。

(4)去臍帶血管、羊膜，取華通膠。

(5)華通膠轉(zhuǎn)移至1個(gè)50 ml離心管中，剪碎至糜狀。

(6)T175瓶中加入40 ml人臍帶干細(xì)胞培養(yǎng)基。

(7)按每個(gè)T175瓶1 ml組織接種?；靹颍o置培養(yǎng)。

(8)靜置培養(yǎng)5 d以上，觀察貼壁克隆少，繼續(xù)培養(yǎng)。

(9)培養(yǎng)7 d后，觀察貼壁克隆多，加培養(yǎng)基培養(yǎng)。

(10)培養(yǎng)9 d后，克隆已有較大規(guī)模增殖，繼續(xù)培養(yǎng)。

(11)培養(yǎng)第10天，按1:1傳代于新 T175瓶。同時(shí)，組織轉(zhuǎn)移至新T175瓶進(jìn)行二次遷移。

實(shí)驗(yàn)總結(jié)

   本次實(shí)驗(yàn)歷時(shí)18天，成功分離培養(yǎng)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞。臍帶組織塊貼壁正常（通常臍帶組織貼壁形成克隆時(shí)間在5-10天）。觀察到貼壁細(xì)胞形態(tài)為長(zhǎng)梭狀，邊緣明亮。在傳代中，P1 代細(xì)胞形態(tài)正常，密度均勻。此后傳代3次，無(wú)老化現(xiàn)象。匯合度較高時(shí)，細(xì)胞呈明顯漩渦狀極性。本產(chǎn)品可正常提取、培養(yǎng) 臍帶間質(zhì)干細(xì)胞 。