影響瓊脂糖凝膠電泳制膠的幾個(gè)因素

對(duì)于一般的分析工作，特別是定量分析工作來(lái)講，人們強(qiáng)調(diào)制備的凝膠要有較好的可重復(fù)性。如果制備得到的凝膠本身沒(méi)有重復(fù)性，比如孔徑前后兩次凝膠相差頗大，那么在 這樣的條件下，所得到的分析結(jié)果，其可信性就有問(wèn)題，往往會(huì)使幾次結(jié)果不能重復(fù)。所以，為了要獲得可靠的分析結(jié)果，在制膠時(shí)對(duì)能影響凝膠聚合的種種因素必須加以控制。

有哪些主要因素，又怎樣來(lái)控制它們的條件，分別簡(jiǎn)述如下：

(1) 制備凝膠用的主要試劑

(a)丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺至少是分析純級(jí)的試劑。存放時(shí)間一般不超過(guò)1年, 如果存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，丙烯酰胺受潮水解，丙烯酸含量增多。若利用它為單體,聚合時(shí)孔徑很 不均一，表現(xiàn)現(xiàn)象是聚合時(shí)間延長(zhǎng)，甚至很難聚合，這就必須重結(jié)晶。對(duì)于定量分析工作一 般都要求對(duì)單體進(jìn)行重結(jié)晶。

丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺應(yīng)放在棕色瓶中，干燥，低溫( + 4C)條件下保存。丙烯酰 胺經(jīng)陽(yáng)光照射，自身會(huì)聚合成長(zhǎng)鏈，酰胺基也會(huì)縮合形成亞胺橋,從而影響交聯(lián)結(jié)果。

配制成的貯存液，也應(yīng)盛于棕色瓶中，于+ 4 C保存，時(shí)間不超過(guò)1個(gè)月。

(b)TEMED應(yīng)密封置于冰箱中貯存，使用的量應(yīng)使凝膠能在30?60分鐘內(nèi)聚合完 成，如前述不再重復(fù)。

(c)過(guò)硫酸銨應(yīng)在臨用前配制。配制好的溶液應(yīng)在冰箱中存放,使用期不超過(guò)1星 期。存放1星期后的過(guò)硫酸銨，可能仍會(huì)起作用，但不適用來(lái)作精細(xì)的分析工作。

(2)溫度

必須保持聚合溫度的恒定。聚合速度與溫度有關(guān)，一般是溫度高聚合快，而聚合的快 慢影響交聯(lián)孔徑的大小，所以，必須保持恒定溫度。通常都固定在與電泳相同的溫度。凝 膠的聚合反應(yīng)是一個(gè)放熱反應(yīng)，所以必須有效地散熱。一般用薄壁玻璃管在流通空氣中進(jìn) 行凝膠聚合，便能達(dá)到散熱的目的°

(3)氧氣

氧是凝膠鏈合成反應(yīng)的終止劑。所以，制膠前必須充分抽氣，使02降低到一定水平 以下或者充以惰性氣體,如氧氣來(lái)降低02的含量。

(4)光照

光照的時(shí)間和強(qiáng)度都和凝膠的聚合速度有關(guān)。因此，必須固定光源強(qiáng)度、光照距離和 光照時(shí)間。

注意和控制好以上幾點(diǎn),制備得到的凝膠其可重復(fù)性的程度就高。