一、標準簡介

  在飲用天然礦泉水檢驗方法（GB 8538）中，產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗一直是一個必檢項目。新版《GB 8538-2022 食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法》已于2022.6.30發(fā)布，2022.12.30正式實施。與舊版本相比，新版標準中，在產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗方法上對計數(shù)培養(yǎng)基、分離方法、確證試驗和計數(shù)方法方面都有較大的變動，本文主要對這些改動進行逐一說明。

二、培養(yǎng)基的改變

  舊版標準《GB 8538-2016 食品安全國家標準  飲用天然礦泉水檢驗方法》中規(guī)定分離培養(yǎng)基采用SPS（亞硫酸鹽-多粘菌素-磺胺嘧啶瓊脂），但新標準中明確改用TSC（胰?-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂）對樣品中的產(chǎn)氣莢膜梭菌進行分離培養(yǎng)。

  有關這兩種培養(yǎng)基的異同及產(chǎn)氣莢膜梭菌在這兩種培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)等，可參考文章：兩種產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗培養(yǎng)基的對比 點擊查看

三、分離方法的改變

  新舊版本對樣品中產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗都涉及濾膜過濾法，但新版標準中，對于濾膜的孔徑描述更加規(guī)范（0.45μm）。

  對于帶菌濾膜的使用，舊版標準中是直接“將濾膜移至SPS瓊脂培養(yǎng)上"，倒置培養(yǎng)；而新版標準中，除了按照舊版標準的方法將濾膜轉(zhuǎn)移到TSC培養(yǎng)基上外，還要求“傾注5mL～10mL冷卻至50℃的TSC瓊脂均勻覆蓋濾膜表面"，在分離方法的操作上相對舊版有所改變。

  兩種分離試驗方法所取得的試驗結果如圖1所示：

圖1 產(chǎn)氣莢膜梭菌分離試驗結果（左：舊版方法；  右：新版方法）

四、確證試驗方法的改變

  舊版標準中，對可疑菌的確證試驗方法為：鏡檢形態(tài)、動力、硝酸鹽還原、牛奶發(fā)酵、卵磷脂分解；而新版標準中，則采用鏡檢、動力-硝酸鹽試驗、牛奶發(fā)酵試驗和乳糖-明膠試驗的方法，差異部分的試驗結果如圖2。

  有關這些驗證試驗的結果現(xiàn)象等詳細信息，可參考文章：產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗解析及注意事項 點擊查看

圖2 新舊版本標準中可疑菌的確證方法試驗結果比較

（左：舊標準 卵磷脂分解試驗；  右：新標準 乳糖-明膠試驗）

五、計數(shù)方法的改變

  舊版標準中規(guī)定“挑取可疑黑色菌落3個-5個"，進行后續(xù)培養(yǎng)確證；新版標準則要求“按比例挑取10個不同形態(tài)的可疑菌落（不足10個則全挑）"進行后續(xù)培養(yǎng)確證試驗。在挑取的菌數(shù)和挑菌方法上都做了更加嚴格明確的規(guī)定。并且，新版標準還明確給出了菌數(shù)計算公式和報告方式（如圖3）。

圖3 新版標準中有關結果與報告的規(guī)定

六、討論

  新版標準除了在培養(yǎng)基、分離方法、確證方法和計數(shù)方法方面有所改變外，在語言描述方面也更加嚴謹規(guī)范。修訂后的版本，更貼近于食品中產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗（如圖4）。

圖4 不同的食品安全國家標準中對產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗程序

（左：GB 4789.13-2012    右：GB 8538-2022）

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