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產品簡介
SDS裂解液：融解 SDS 裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入 PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1 mM。
詳細介紹
SDS裂解液
| SDS Lysis Buffer | ||||||||
| Cat No:DY7008 | ||||||||
| Size:100ml | ||||||||
| 產品組分 | ||||||||
| 組分 Contents | DY7003A | |||||||
| SDS裂解液 | 100 ml | |||||||
| 儲運條件 | ||||||||
| 本產品-20℃ 保存。 | ||||||||
| 說 明 | ||||||||
| 本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途。 | ||||||||
| 產品簡介 | ||||||||
| SDS 裂解液(SDS Lysis Buffer)是一種比較強烈的細胞組織裂解液。SDS 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、ChIP(染色質免疫共沉淀，chromatin immunoprecipitation)等實驗。SDS 裂解液的主要成分為 50mM Tris(pH8.1)，1% SDS，以及 2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。 SDS 裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA 蛋白濃度測定試劑盒（LY7052）測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用 Bradford 法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。 | ||||||||
| 實驗前準備及注意事項 | ||||||||
| 1. 為取得好的使用效果，盡量避免過多的反復凍融。可以適當分裝后使用。 | ||||||||
| 2．為防止蛋白降解，所有的操作盡量在冰上進行。 | ||||||||
| 3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 | ||||||||
| 操作步驟 | ||||||||
| 一、培養(yǎng)細胞樣品 | ||||||||
| 1. 融解 SDS 裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入 PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1 mM。 | ||||||||
| 2.1對于貼壁細胞： | ||||||||
| 去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 μl SDS 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。 通常裂解液接觸細胞 1-2 s后,細胞就會被裂解。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解 10 min。 | ||||||||
| 2.2對于懸浮細胞： | ||||||||
| 離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞加入150-250 μl SDS 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。如果細胞量較多，必需將細胞分裝成 50-100 萬細胞/管，然后再裂解。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解 10 min。 | ||||||||
| 3. 充分裂解后，10000-14000×g 離心 3-5 min，取上清，即可進行后續(xù)的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。 | ||||||||
| 注意：對于裂解液的用量，通常 6 孔板每孔細胞加入 150μl 裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200 μl 或 250 μl。如果用于 ChIP，建議 6 孔板每孔細胞至少加入 200μl 裂解液。 | ||||||||
| 二、組織樣品： | ||||||||
| 1. 把組織剪切成細小的碎片。 | ||||||||
| 2. 融解 SDS 裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入 PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1 mM。 | ||||||||
| 3. 按照每 20 mg 組織加入150-250 μl SDS 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量)。 | ||||||||
| 4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解 10 min。 | ||||||||
| 5. 充分裂解后，10000-14000×g 離心 3-5 min，取上清，即可進行后續(xù)的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。 | ||||||||
| 注意：若組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈渦旋使樣品裂解充分。10000-14000×g 離心 3-5 min，取上清，即可進行后續(xù)的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分 | ||||||||