FastPfu DNA polymerase 酶

FastPfu DNA polymerase 酶

產(chǎn)品應(yīng)置于-20 ℃保存。

產(chǎn)品質(zhì)控

（1）性能檢測 1：

在50 μL PCR 反應(yīng)體系加入 1 U FastPfu DNA Polymerase、100 ng Human RP11 13M9-pBACe3.6 質(zhì)粒，

擴(kuò)增 15 kb 的DNA 目的片段，在 30 個(gè)循環(huán)擴(kuò)增后經(jīng) 1%瓊脂糖凝膠檢測可在 15 kb 處檢測到較亮的單一目

的條帶。

（2）性能檢測 2：

在50 μL PCR 反應(yīng)體系加入 1 U FastPfu DNA Polymerase、大腸桿菌菌落，擴(kuò)增 5 kb 的DNA 目的片

段，在 30 個(gè)循環(huán)擴(kuò)增后經(jīng) 1%瓊脂糖凝膠檢測可在 5 kb 處檢測到較亮的單一目的條帶。

（3）大腸桿菌核酸殘留檢測：

在20 μL 熒光定量 PCR 反應(yīng)體系加入 1 U FastPfu DNA Polymerase 和大腸桿菌特異基因擴(kuò)增引物（如

gapA）；在不加入大腸桿菌 DNA 模板的情況下，20 個(gè)循環(huán)內(nèi)熒光信號(hào)值在基線范圍。

 FastPfu DNA polymerase 酶

常規(guī) PCR 反應(yīng)體系： 

1. 在冰浴上設(shè)置 PCR 反應(yīng)（供參考）*：

模板:                     < 500 ng

2× FastPfu Buffer:   25 μL

Primer 1/2:               0.2 - 1.0 μM

dNTPs (10 mM):     1 μL

FastPfu:                  1 μL

滅菌蒸餾水 Up to 50 μL

2. PCR 反應(yīng)參數(shù)（供參考）**：

(起始變性): 95 ℃ 5 min

(解鏈): 98 ℃ 5 sec

(退火): 55 ℃ 30 sec

(延伸): 72 ℃ x min （30-35 循環(huán)：2 kb/min）

(終延伸): 72 ℃ 7 min

* 針對(duì)不同類型的模板，所需的模板量會(huì)有不同，如基因組和質(zhì)粒，等等；需要根據(jù)實(shí)際情況，添加合適的模

板量；** 退火溫度需根據(jù)引物和模板實(shí)際的 G+C 含量來作調(diào)整