MC1061F-感受態(tài) 技術新聞

MC1061F-：                                               100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

araD139 Δ (araA-leu)7697 Δ(lac)X74 galK16 galE15(GalS) lambda- e14- mcrA0 relA1 rpsL150

(Str^R) spoT1 mcrB1 hsdR2

產(chǎn)品說明

MC1061F-菌株來源于E.coli B/r型SB3118菌株，同時也是DH10b及*0的母本菌株。MC1061F-化轉感受態(tài)細胞轉化效率*，可用作實驗室的常規(guī)質粒構建及噬菌體展示實驗，但缺乏F`因子，不能用于絲狀噬菌體（比如M13）的感染。不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶對質粒的污染。此菌株具有鏈霉素抗性。唯地生物生產(chǎn)的MC1061F-感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>2×10⁹ cfu/μg DNA。

操作方法

1. MC1061F-感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15 h。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。