質(zhì)粒菌株庫 返回列表頁

　　BL21(DE3）該菌株用于高效表達(dá)克隆于有T7噬菌體啟動子的表達(dá)載體的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于噬菌體DE3區(qū)，該區(qū)整合于BL21的染色體上。天然缺失外膜蛋白酶ompT和ATP依賴的蛋白酶Lon (La)，利于異源蛋白的表達(dá)。在培養(yǎng)皿上的生長時(shí)間約為10小時(shí)左右。ER2566該菌株用于高效表達(dá)克隆于有T7噬菌體啟動子的表達(dá)載體的基因。在培養(yǎng)皿上的生長時(shí)間約為10小時(shí)左右。

　　DH5a一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其80lacZIM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，即可以用于藍(lán)白斑顯示。該菌株也缺失多種蛋白酶，在培養(yǎng)皿上的生長時(shí)間約為12小時(shí)左右。

　　JM101一種可支持帶有琥珀突變的載體生長的宿主菌，在培養(yǎng)皿上的生長時(shí)間約為10小時(shí)左右。

　　JM109一種帶有琥珀突變的載體生長的重組缺陷的抑制型菌株，對轉(zhuǎn)染的DNA有修飾作用但無限制作用，在培養(yǎng)上的生長時(shí)間約為10小時(shí)左右。

　　HB101一種通常用于大規(guī)模制備質(zhì)粒的抑制型菌株，它是一種轉(zhuǎn)化效率很高的大腸桿菌K12×大腸桿菌B的雜交菌株,在培養(yǎng)皿上的生長時(shí)間約為10小時(shí)左右。

　　常用原核表達(dá)質(zhì)粒一覽表

　　質(zhì)粒名稱pRSET p24B11 pTYB pGEX pET pTRX-Fus pBV pMAL實(shí)驗(yàn)室系列數(shù)31462122啟動子T7T7T7 PtacT7 PLPL Ptac大小(Kb)2.95.47.34.94.73.5/6.7抗性標(biāo)記Ap Kan ApAp Kan ApAp Ap融合蛋白大小(kD)3-5 kD 0-1 kD 55 kD 26 kD 3-4 kD 11 kD/43 kD誘導(dǎo)物IPTG IPTG IPTG IPTG IPTG Trp 420C IPTG

　　如何提高目的蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)量及可溶性表達(dá)?如何防止目的蛋白的降解?

　　融合蛋白的表達(dá)水平主要受目的蛋白影響、密碼子不適、疏水性強(qiáng)、mRNA降解、或由于蛋白錯誤折疊而水解都可能造成表達(dá)水平低，可嘗試不同的生長和表達(dá)條件來提高融合蛋白的表達(dá)量，低溫誘導(dǎo)可降低包含體的形成及避免水解;運(yùn)用最適密碼子可提高表達(dá);也可能由于目的蛋白對宿主細(xì)胞有毒性而使克隆不穩(wěn)定。故表達(dá)時(shí)可利用豐富的培養(yǎng)基、新鮮的單菌落、低溫誘導(dǎo)、低濃度的IPTG、減少誘導(dǎo)時(shí)間等條件來提高蛋白及可溶性蛋白的產(chǎn)量。蛋白酶抑制劑，蛋白酶缺陷的工程菌或者低溫誘導(dǎo)可防止目的蛋白降解，純化時(shí)為防止降解可使用變性條件，如6M脲等。

　　質(zhì)粒菌株庫pMAL純化系統(tǒng)

　　pMAL-p2為分泌型表達(dá)載體，表達(dá)的融合蛋白分布于大腸桿菌外周腔，用冷滲透法即可獲得較純的融合蛋白。pMAL-c2表達(dá)的可溶性融合蛋白多位于大腸桿菌細(xì)胞質(zhì)中，可按常規(guī)方法進(jìn)行純化。二者均為Ptac啟動子，大小約為6.7Kb，不同的是pMAL-c2無malE信號序列。

　　大腸編輯質(zhì)粒 pRE112/X7213

　　大腸編輯質(zhì)粒 pKD46

　　大腸編輯質(zhì)粒 pCP20

　　大腸編輯質(zhì)粒 大腸Cas9質(zhì)粒 pwtCas9-bacteria #44250

　　大腸編輯質(zhì)粒 大腸Cas9質(zhì)粒 pC001-huLshC2C2-MBP 79150

　　大腸編輯質(zhì)粒 大腸Cas9質(zhì)粒 pCas9 #42876

　　大腸編輯質(zhì)粒 大腸Cas9質(zhì)粒 pCAS #62225

　　大腸編輯質(zhì)粒 pCAS配套質(zhì)粒 pTargetF #62226

　　大腸編輯質(zhì)粒 大腸Cas9質(zhì)粒 pCRISPR #42875

　　哺乳編輯質(zhì)粒

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pX260 #42229

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pX330 #42230

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pX335 #42335

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pX458 #48138

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pX459 #48139

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pX458M（+EZ-GuideXH）

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pX459M（+EZ-GuideXH）

　　EZ-GuideXH

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pX461 #48140

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pX552 #60958

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pX601 #61591

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pX602 #61593

　　哺乳編輯質(zhì)粒 LentiCRISPR V2 #52961

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pLenti dCasVP64-Blast #61425

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pDD162 (Peft-3::Cas9 + Empty sgRNA) #47549

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pmCherry-C1-EGFP（CRISPR驗(yàn)證質(zhì)粒）

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pY010 (pcDNA3.1-hAsCpf1) #69982

　　哺乳編輯質(zhì)粒 addgene53189 ph7SK-gRNA

　　哺乳編輯質(zhì)粒 pJ23sgRNA-eGFP 3

　　編輯質(zhì)粒 酵母 Cas9-NAT酵母 #64329

　　編輯質(zhì)粒 酵母 Cas9-NAT-kan酵母

　　編輯質(zhì)粒 pdCas9-Tet1-CD #83340

　　哺乳報(bào)告基因質(zhì)粒 pGL3-Basic

　　哺乳報(bào)告基因質(zhì)粒 pGL3-Promoter

　　哺乳報(bào)告基因質(zhì)粒 pGL3-enhancer

　　哺乳報(bào)告基因質(zhì)粒 pGL3-Control

　　哺乳報(bào)告基因質(zhì)粒 pRL-TK

　　哺乳報(bào)告基因質(zhì)粒 pRL-SV40

　　哺乳報(bào)告基因質(zhì)粒 pGL4.10[luc2]

　　哺乳報(bào)告基因質(zhì)粒 pGL4.18[luc2PNeo]

　　自噬相關(guān)質(zhì)粒 ptfhLC3B人

　　自噬相關(guān)質(zhì)粒 ptfLC3大鼠

　　自噬相關(guān)質(zhì)粒 HH-plasmid A1 pCDNA3.1(+)-3HA-hLC3B人

　　自噬相關(guān)質(zhì)粒 慢病毒 plvx-GFP-LC3人

　　自噬相關(guān)質(zhì)粒 HH-plasmid A1 pCDNA3.1(+)-hLC3B人

　　自噬相關(guān)質(zhì)粒 pEGFP-LC3人

　　自噬相關(guān)質(zhì)粒

　　自噬相關(guān)質(zhì)粒

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pCDNA3.0

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pIRES2-zsGreen1

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pTRACER-CMV3

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pVAX1

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pCEP4

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pCEP4-CAT

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pBudCE4.1

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pBudCE4.1/lacZ/CAT

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pTagBFP-N vector

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 p3XFLAG-CMV-7.1

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pCS2 Notch1 Full Length-6MT（Plasmid #41728）

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pMy-BirA-T2A-eGFP

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 熒光共振能量轉(zhuǎn)移 pBIFC-bFosVC155

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 熒光共振能量轉(zhuǎn)移 pBIFC-bJunVN173

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 熒光共振能量轉(zhuǎn)移 pBIFC-VC155

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pBIFC-CC155

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 細(xì)胞自噬 pEGFP-LC3人

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pCI-neo-GFP

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pEYFP-Actin

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 FLAG-CMV-6a

　　哺乳表達(dá)質(zhì)粒 pDsReD1-C1

　　大腸表達(dá)質(zhì)粒 pGEX-4T-2

　　大腸表達(dá)質(zhì)粒 pGEX-4T-3

　　大腸表達(dá)質(zhì)粒 pKK233-2

　　大腸表達(dá)質(zhì)粒 pSR43.6r

　　大腸表達(dá)質(zhì)粒 pWUR702 53079

　　逆轉(zhuǎn)錄類質(zhì)粒 逆病毒載體 pBABE-HA-puro

　　逆轉(zhuǎn)錄類質(zhì)粒 逆病毒載體，熒光素酶 pBABE-LUC+

　　逆轉(zhuǎn)錄類質(zhì)粒 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，LCNRNA LZRS-HOTAIR

　　逆轉(zhuǎn)錄類質(zhì)粒 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，對照 LZRS-control

　　逆轉(zhuǎn)錄類質(zhì)粒 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 pLEGFP-N1