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一、載體構建的基本實驗步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備;
(2)目的DNA片段和載體的連接;
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化;
(4)克隆篩選。
(5)測序驗證及結(jié)果交付
二、詳細內(nèi)容
1、以PCR擴增為基礎的各類載體構建,如大腸桿菌表達載體、酵母表達載體、桿狀病毒表達載體、哺乳動物表達載體;報告基因載體等;
2、基因定點突變,包括單點突變,多點突變,基因缺失等;
3、載體元件替換和改造;
4、siRNA載體和miRNA表達載體構建;
5、過表達載體構建。
pTRV2基因沉默質(zhì)粒 |
pTRV2-Gateway基因沉默質(zhì)粒 |
pFGC5941基因沉默質(zhì)粒 |
AtU6-26-sgRNA-SK基因編輯質(zhì)粒 |
pCAMBIA35s-4×Myc-MCS-3×FLAG蛋白表達質(zhì)粒 |
pCAMBIA1305.1蛋白表達質(zhì)粒 |
pCAMBIA1303蛋白表達質(zhì)粒 |
pCAMBIA1301-35SN蛋白表達質(zhì)粒 |
pCAMBIA1300蛋白表達質(zhì)粒 |
pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-Usp7-m-shRNA2基因沉默質(zhì)粒 |
pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-Usp7-m-shRNA1基因沉默質(zhì)粒 |
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