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一、載體構(gòu)建的基本實驗步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備;
(2)目的DNA片段和載體的連接;
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化;
(4)克隆篩選。
(5)測序驗證及結(jié)果交付
二、詳細內(nèi)容
1、以PCR擴增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建,如大腸桿菌表達載體、酵母表達載體、桿狀病毒表達載體、哺乳動物表達載體;報告基因載體等;
2、基因定點突變,包括單點突變,多點突變,基因缺失等;
3、載體元件替換和改造;
4、siRNA載體和miRNA表達載體構(gòu)建;
5、過表達載體構(gòu)建。
pLentiCRISPRV2-DHODH-sgRNA3(human)基因編輯質(zhì)粒 |
pLentiCRISPRV2-CRACD-sgRNA1(human)基因編輯質(zhì)粒 |
pLentiCRISPRV2-CRACD-sgRNA3(human)基因編輯質(zhì)粒 |
pDONR201基因模板質(zhì)粒 |
pDONR207基因模板質(zhì)粒 |
pET28a-NSP7(SARS-CoV)蛋白表達質(zhì)粒 |
pLentiCRISPRV2-DHODH-sgRNA2(human)基因編輯質(zhì)粒 |
pSAT6-nEYFP-N1雙分子熒光質(zhì)粒 |
pSAT6-nEYFP-C1雙分子熒光質(zhì)粒 |
pSAT6-cEYFP-C1-B雙分子熒光質(zhì)粒 |
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