HPLC色譜柱(分離柱)是非常重要的部件之一，一般可分為反相柱、正相柱、其他柱三類。

 

①反相色譜柱：它是使用最多的一種色譜柱；一般約占70％；其中，C18柱約占65％；C8柱占15％左右；苯基柱＜5％。反相色譜是目前應(yīng)用得最為廣泛的一種高效液相色譜方法。C18在反相色譜中應(yīng)用得最為廣泛。大概超過一半。

 

②正相色譜柱：正相色譜柱也經(jīng)常被使用，它約占20％。

 

③其他色譜柱(手性柱、離子交換柱)：約占10％。

 

HPLC色譜柱的常見故障有哪些？

 

1、柱壓過高

可能是微粒堵塞． 柱床膨脹，不可逆吸附， 細(xì)菌生長等造成的。也有可能是系統(tǒng)反壓?jiǎn)栴}， 例如阻尼器堵塞，進(jìn)樣器堵塞， 管路或連接口堵塞。 在線過濾器不干凈， 壓力傳感器不準(zhǔn)確等。

2、柱效低

可能是色譜柱被污染、 過濾片部分堵塞、色譜柱內(nèi)的死體積造成，例如流動(dòng)相pH值或者組成不合適造成固定相損失。 流動(dòng)相急劇變化造成固定相物理損壞， 機(jī)械振動(dòng)造成固定相產(chǎn)生裂縫，柱床收縮或干枯。也有可能是儀器連接的問題， 認(rèn)真檢查進(jìn)樣器、檢測(cè)器、 管路、 保護(hù)柱和在線過濾器等是否連接好，也可能是色譜柱沒有平衡好， 進(jìn)樣量過大等問題。

3、重復(fù)性差、不出峰、回收率低

可能是色譜柱被污染， 流動(dòng)相 pH值或者組成不合適造成固定相損失 ， 樣 品溶劑 不同或樣品本身不穩(wěn)定， 固定 相極性過強(qiáng)或者流動(dòng)相極性過弱． 或者發(fā)生非特異性吸附。也可能梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)平衡時(shí)間不足，溫度波動(dòng)， 流動(dòng)相組成改變， 樣品溶劑不同， 樣品穩(wěn)定性不好，方法的開發(fā)不好， 緩沖液的酸堿度不合適或者緩沖能力不足。