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大鼠海馬神經(jīng)元細胞培養(yǎng)和傳代流程
體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元細胞細胞周期有限；建議使用與procell配套的專用生長培養(yǎng)基和正確的操作方法進行培養(yǎng)，以保證細胞處于理想培養(yǎng)狀態(tài)。procell實驗室分離的大鼠海馬神經(jīng)元細胞采用胰蛋白酶消化、神經(jīng)元特異性培養(yǎng)基培養(yǎng)、篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制制備。細胞總數(shù)約為5×105個細胞/瓶。
大鼠海馬神經(jīng)元細胞培養(yǎng)和傳代流程（請嚴(yán)格按照無菌操作）：
1、從原培養(yǎng)瓶中吸出培養(yǎng)基，用PBS緩沖液潤濕細胞兩次，加入2-3ml025%胰蛋白酶消化細胞（注意消化時間，一般控制在1-2min內(nèi)）；
2、在顯微鏡下觀察消化情況。當(dāng)細胞邊緣收縮松散貼壁時（不建議消化到細胞漂?。?，去除胰蛋白酶，加入6-8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹干細胞層，盡量吹散細胞層；
3、將部分細胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿/瓶中，加入適量的*培養(yǎng)基，將細胞懸液打勻，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4、注意培養(yǎng)基pH值的變化，定期更換溶液（每周2-3次），待細胞密度達到80%后重復(fù)1次操作或冷凍保存。
特別注意：如果使用公共實驗室接觸大鼠海馬神經(jīng)元細胞培養(yǎng)，建議添加雙抗體培養(yǎng)。
1、收到細胞后，請盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基。如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%血清（原瓶培養(yǎng)基連續(xù)使用時間不超過72小時）；
2、貼壁細胞在收到當(dāng)天不要立即消化。請更換細胞溶液，放入培養(yǎng)箱中孵育至次日進行消化和繼代培養(yǎng)。請優(yōu)先使用直徑6cm的培養(yǎng)皿進行繼代培養(yǎng)；
3、培養(yǎng)瓶壁破裂、漏水，請及時拍照記錄并與實驗室聯(lián)系。