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披沙煉金 | 配方顆粒色譜柱推薦之金錢草檢測
在之前的文章中，我們主要為大家梳理并推薦了適用于各類中藥配方顆粒檢測的安捷倫色譜柱，并對廣金錢草提供推薦色譜柱和分析實(shí)例。相信這滿滿的干貨，一定讓大家意猶未盡。那么本期就讓我們持續(xù)輸出，為大家?guī)黻P(guān)于金錢草配方顆粒檢測的色譜柱推薦。趕緊跟上，一起出發(fā)吧！
安捷倫創(chuàng)新的色譜柱 InfinityLab Poroshell 120 采用 Agilent 專有的表面多孔型填料技術(shù), 其 1.9μm 色譜柱具有以下優(yōu)點(diǎn)：
柱效比 1.8μm 全多孔類型的色譜柱更高，具更高峰容量，適合復(fù)雜樣品分析；
與市場上同類產(chǎn)品比較，具有更好的峰型；
高能耐 1300 bar 壓力，具有較長的柱壽命，即使在接近極限的壓力下使用；
能和 Agilent 1290 Infinity 等超高效液相色譜完美匹配，實(shí)現(xiàn)快速或高分離度分析。
本實(shí)驗(yàn)選用的色譜柱 Poroshell 120 SB-C18, 2.1x100mm, 1.9μm 與原標(biāo)準(zhǔn)中 1.6μm 的色譜柱相比柱效相當(dāng)，但壓力相對降低，有利于延長色譜柱壽命和提高方法的耐用性。
根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局 《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)》中金錢草配方顆粒的檢測項(xiàng)目，對其特征譜圖和含量測定都采用高效液相色譜法。特征譜圖測定中要求理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于 10000，以及對供試品應(yīng)呈現(xiàn)的特征峰相對保留時(shí)間和相對峰面積做了規(guī)定。含量測定中規(guī)定了理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于 2500。
1、特征譜圖
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
圖 1. 金錢草配方顆粒供試品的特征譜圖與標(biāo)準(zhǔn)中對照譜圖的比較 （峰2（S1）：山柰酚-3-O-（2,6-α-L-二吡喃鼠李糖基-β-D-吡喃葡萄糖苷）；峰4：山柰酚-3-O-蕓香糖苷；峰5（S2）：槲皮素；峰6：山柰酚）
色譜條件：
流動(dòng)相：A：0.2%磷酸；B：乙腈
梯度：0-15min，12%-15%B；15-30min，15%-35%B；30-30.1min，35%-12%B；30.1-35min，12%B
流速：0.2ml/min
柱溫：30°C
檢測波長：364nm(4nm),Ref:off;采樣頻率：20Hz
進(jìn)樣量：1μL
系統(tǒng)適用性結(jié)果見下表：
結(jié)果
1）供試品色譜中呈現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的7個(gè)特征峰，且相對保留時(shí)間都在規(guī)定范圍內(nèi)；
2）峰2、峰4與S2峰的相對峰面積在規(guī)定范圍內(nèi)；
3）理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算為408280，遠(yuǎn)高于規(guī)定值10000，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。
2、含量測定
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
圖 2. 金錢草配方顆粒供試品含量測定 HPLC 法和 UHPLC 法譜圖對照
色譜條件：
流動(dòng)相：A：0.4%磷酸水溶液，B：甲醇；52%A/48%B(HPLC法)，55%A/45%B(UHPLC法)
流速：1ml/min(HPLC法)；0.5ml/min(UHPLC法)
柱溫：30°C
檢測波長：360nm(4nm),Ref:off;采樣頻率：2.5Hz(HPLC法)；20Hz(UHPLC法)
進(jìn)樣量：10μL(HPLC法)；1μL(UHPLC法)
系統(tǒng)適用性結(jié)果見下表：
結(jié)果：
1）主峰槲皮素和山柰酚峰型對稱，分離度均符合含量測定要求，理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算均符合標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定；
2）方法從HPLC轉(zhuǎn)移到UHPLC，分析時(shí)間縮短至原來的1/5，且UHPLC方法提高了槲皮素,山柰酚和樣品中雜峰的分離度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
本實(shí)驗(yàn)選用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 和 ZORBAX SB-C18 色譜柱對金錢草配方顆粒特征譜圖及含量進(jìn)行了檢測，均符合標(biāo)準(zhǔn)中對系統(tǒng)適用性的要求。本方法可用于金錢草配方顆粒的分離和檢測，為該配方顆粒的質(zhì)量保證提供檢測依據(jù)。
儀器系統(tǒng)及色譜柱推薦
1290 四元 UHPLC 系統(tǒng): 全能泵(G7104A)，自動(dòng)進(jìn)樣器(G7167B)，柱溫箱(G7116B)，DAD(G7117B)
1260 四元 UHPLC 系統(tǒng): 四元泵(G7111B)，自動(dòng)進(jìn)樣器(G7129A)，柱溫箱(G7116A)，DAD(G7115A)
其它詳細(xì)操作可以參考 Agilent 配方顆粒圖譜集，或聯(lián)系 Agilent。