土壤淀粉酶（Soil Amylase，S-AL）試劑盒說(shuō)明書
微量法100T/48S
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
淀粉酶（EC3.2.1.1）是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀粉酶主要來(lái)自于微生物，是一種重要的酶制劑，廣泛應(yīng)用于糧食加工、食品、釀造、發(fā)酵、紡織品工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)。
測(cè)定原理：
淀粉酶水解淀粉產(chǎn)生還原糖，可與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì)，在508nm處有特征吸收峰，顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖量成正比。
需自備的儀器和用品：
天平、水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、甲苯。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體4mL×1瓶，4℃保存。若出現(xiàn)沉淀析出，需70℃加熱溶解后再用。
試劑三：液體12mL×1瓶，4℃保存。
測(cè)定操作表：
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
土樣（g） | 0.02 | 0.02 |
甲苯（μL） | 10 | 10 |
25℃靜置15min | ||
試劑一（μL） | 110 | 50 |
試劑二（μL） | 60 | |
充分混勻，37℃震蕩1h，8000rpm，25℃，離心10min | ||
上清液（μL） | 100 | 100 |
試劑三（μL） | 100 | 100 |
充分混勻，90℃水浴5min，待冷卻后，于微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定508nm吸光值，分別記為A對(duì)照管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。 | ||
計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.2525x - 0.034，R2 = 0.9917
酶活單位定義：每g土樣每天催化生成1mg還原糖為一個(gè)酶活力單位。
S-AL（mg/d /g 鮮重）=（△A +0.034）÷ 0.2525×V反總÷W÷T
= 10.464×（△A +0.034）÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.11mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/24d；W：樣本質(zhì)量，g。
b．用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.1263x - 0.034，R2 = 0.9917
酶活單位定義：每g土樣每天催化生成1mg還原糖為一個(gè)酶活力單位。
S-AL（mg/d/g）=（△A +0.034）÷ 0.1263×V反總÷W÷T
=20.928×（△A +0.034）÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.11mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/24d； W：樣本質(zhì)量，g。
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