熱啟動(dòng) Taq DNA 聚合酶設(shè)計(jì)用于增強(qiáng) DNA 擴(kuò)增的特異性、敏感性和產(chǎn)量。使用該酶可在室溫配制反應(yīng)體系，使用非常方便。本產(chǎn)品是一種基于化學(xué)修飾法的重組熱啟動(dòng) Taq DNA 聚合酶，蛋白分子氨基酸殘基上增加了熱不穩(wěn)定的封閉基團(tuán)。該酶在室溫下沒有活性，避免形成引物二聚體和非特異性延伸。從而增加 DNA 擴(kuò)增的特異性。95℃加熱 4 分鐘可恢復(fù)酶活性。活化的酶具有與熱啟動(dòng) Taq DNA 聚合酶相同的功能：催化 5’→3’方向合成DNA、無(wú)可檢測(cè)的 3’→5’校正外切酶活性、具有較低的 5’→3’外切酶活性。該酶還具有脫氧核糖核酸酶轉(zhuǎn)移活性，在 PCR 產(chǎn)物的 3’-端多加 1 個(gè)腺嘌呤?；罨皺z測(cè)不到這些活性。此產(chǎn)品特點(diǎn)是：

1.高產(chǎn)量擴(kuò)增復(fù)雜模板。

2.不需要 95℃加熱 4 分鐘即可激活酶活性。

3.PCR 特異性高-降低錯(cuò)配效應(yīng)和減少引物二聚體的生成。

4.增強(qiáng)的 PCR 敏感性。

5.使用方便，室溫配制 PCR 反應(yīng)體系。

6.擴(kuò)增產(chǎn)物具有 3’-dA 突出末端。

規(guī)格及成分：

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用舉例

注意：

以下舉例為常規(guī) PCR 反應(yīng)系統(tǒng)，僅供參考。實(shí)際反應(yīng)條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異，需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物長(zhǎng)

短等具體情況，設(shè)定最佳反應(yīng)條件。10×HotMaster Taq Buffer 中含有 Mg2+，配有濃度為 15 mM MgCl2 。實(shí)際 PCR 反應(yīng)可因模板等的不同酌情向反應(yīng)體系中添加適量的 Mg2+ ，設(shè)置最佳的反應(yīng)體系。該酶最適延伸溫度為 65℃，可在 60℃-70℃之間調(diào)整。

以人基因組 DNA 為模板，護(hù)增 1kb 的片段

1.      反應(yīng)體系的建立：50μL 反應(yīng)體系如下（可根據(jù)比例放大或縮小反應(yīng)體系）：

Template                               ＜1μg

Primer 1（10 μM）                       1μl

Primer 2（10 μM）                       1μl

10×Hot Start Taq Buffer                 5μl

dNTP Mixture（2.5 mM）                 4μl Hot Start Taq DNA 聚合酶（2.5U/μl）                                         0.5-1μl ddH₂O 補(bǔ)至 50μL

2.      PCR 反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置：

94℃  2 min

94℃ 20 sec       30 cycles

55℃ 20 sec

65℃  1 min 65℃  5min

3.      結(jié)果檢測(cè)：反應(yīng)結(jié)束后取 5 μl 反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

應(yīng)用

1. 啟動(dòng) PCR。

2. 高產(chǎn)量擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá) 3kb 片段。

3. RT-PCR

4. 特異性擴(kuò)增復(fù)雜 cDNA 和基因組模板。

5. 擴(kuò)增低拷貝 DNA 模板。

6. 實(shí)時(shí) PCR。

7. 多重 PCR。

8. 制備 TA 克隆用 PCR 產(chǎn)物。