大鼠膠原吡啶交聯(lián)（PYD）免疫組化試劑盒

該試劑盒以HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）為基礎(chǔ)，可用于檢測(cè)細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性膠原吡啶交聯(lián)（PYD）抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的膠原吡啶交聯(lián)（PYD）一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特異一抗—生物素化二抗—HRP-SA復(fù)合物，顯微鏡下觀察成像。

試劑盒所含試劑：

試劑A 通透液：0.1% Triton-X 100   10 mL（選用）

試劑B 封閉緩沖液（封閉用） 20 mL

試劑C （原裝-進(jìn)口分裝）已稀釋的即用型膠原吡啶交聯(lián)（PYD）一抗（2.5ml）

試劑D （原裝-進(jìn)口分裝）生物素化羊抗兔IgG 1支

（濃度1.5 mg/mL，稀釋比為1:300~1:500）50 μL+抗體稀釋液20ml

試劑E HRP-SA復(fù)合物1支（濃度1 μM，稀釋比1:50~1:200）100 μL

試劑F DAB顯色液 5ml

用戶自備試劑：

1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）

三羥基氨基甲烷1.21g

氯化鈉7.6g

加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4，最后定容至1000mL

TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%體積比）

2．抗原修復(fù)液（依檢測(cè)抗原不同而選擇不同的修復(fù)液）

10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液

檸檬酸0.38g

檸檬酸三鈉2.45g

加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，最后定容至1000mL

或：0.5M EDTA修復(fù)液（pH8.0）

EDTA·2H2O 186.1g

檸檬酸三鈉2.45g

加蒸餾水700mL，用10mM NaOH調(diào)pH值至8.0，最后定容至1000Ml

3. 緩沖甘油封固劑10 mL

4. Tween 20 5 mL

注意事項(xiàng)：

1. 修復(fù)后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導(dǎo)致結(jié)晶或抗原封閉。

2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使用。

3. 若試劑為微量濃縮液，用前應(yīng)低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。

4. 封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween 20，否則會(huì)影響結(jié)果觀察。

5. 如須復(fù)染細(xì)胞核，則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封片。

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