細胞牽張培養(yǎng)結(jié)合熒光染色技術(shù)

細胞機械刺激培養(yǎng)后的熒光染色

活細胞中水的比例高，其結(jié)構(gòu)通常是透明的。研究者通過使用不同染色劑可以優(yōu)先染色某些部分，或觀察細胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)。例如細胞核、細胞壁，或整個細胞。

幾乎所有機械傳導(dǎo)研究的驅(qū)動目標都是細胞對機械刺激的生化反應(yīng)。因其往往伴隨著細胞骨架和形態(tài)的變化，有效使用細胞熒光染色技術(shù)可以對細胞信號進行重要的定性和定量觀察。

然而，體外牽張培養(yǎng)使用的PDMS柔性基底膜可能會帶來新的挑戰(zhàn)，特別是與通常使用的培養(yǎng)皿或玻片相比。

拉伸膜是否會降解

使用丙酮或氯仿，腔室的硅樹脂膜可能會略微膨脹；甲醇則沒有問題，可以觀察到將細胞平面?zhèn)确旁谏w玻片上的良好圖像。

取材

待細胞拉伸結(jié)束，可使用手術(shù)刀或類似工具切下一塊PDMS，保持包被涂層和細胞仍在其上。建議將膜切成矩形，以識別拉伸方向，避免用標簽等損害樣品質(zhì)量。

準備好膜后，將其細胞面朝下放置在載玻片上，并使用封裝介質(zhì)，如PermaFluor™封片劑。

熒光染色步驟

滲透：通常使用溫和的表面活性劑溶解細胞膜，以允許較大的染料分子進入細胞內(nèi)部。

固定：用于在制備過程中保存細胞或組織形態(tài)。大多數(shù)固定程序都需要添加化學(xué)固定劑，可以在蛋白質(zhì)之間形成化學(xué)鍵，以增加蛋白質(zhì)的剛性。常見的固定劑包括甲醛、乙醇、甲醇等。

安裝：將樣品附著到載玻片上進行觀察和分析。細胞可以直接生長到載玻片上，也可以使用無菌技術(shù)將松散細胞轉(zhuǎn)移到載玻片。組織材料的切片也可以應(yīng)用于顯微鏡載玻片以進行觀察。

染色：對樣本進行染色，以使細胞、組織、成分或代謝過程著色。該過程可能涉及將樣品浸入染料溶液中，然后沖洗并在顯微鏡下觀察樣品。有些染料需要使用媒染劑——與染料反應(yīng)形成不溶性有色沉淀的化學(xué)化合物。當(dāng)過量的染料溶液被洗掉時，媒染的印記會留在樣品上。