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全自動磁珠提取儀KingFisher技術(shù)的工作原理:樣品、溶液和磁珠置于微孔板或管中,磁棒表面套有專門的磁套用于保護(hù)磁棒,避免其與樣品/溶液/磁珠直接接觸。磁棒的工作模式可以分為以下四種(以樣品管為例):
1、收集磁珠:在磁珠收集過程中,磁棒插入磁套,與磁套一起在樣品管中上下移動,混勻的磁珠被磁棒吸附在磁套的下沿。完成收集的磁棒與磁套一起升起,等待轉(zhuǎn)移至下一個位置。
2、釋放磁珠:當(dāng)完成磁珠的收集后,磁棒與磁套一起轉(zhuǎn)移到下一個的樣品管位置,準(zhǔn)備釋放磁珠。在釋放過程中,磁棒保持靜止(高位),而磁套下降進(jìn)入樣品管(低位),這使得磁套下沿的被吸附的磁珠脫離磁棒的吸引,釋放進(jìn)入樣品管。磁套繼續(xù)在溶液中上下運(yùn)動,使磁珠在溶液中充分混合。
3、清洗磁珠:磁珠清洗是磁珠提取純化中最為關(guān)鍵的一步。通過清洗,可以將那些與磁珠非特異性結(jié)合的雜質(zhì)洗去,從而提高產(chǎn)物的純度。在清洗時,磁套下降進(jìn)入溶液,而磁棒停留在上方,通過磁套的上下運(yùn)動,使得磁珠在溶液中充分混合。為了地實現(xiàn)清洗效果,可以選擇不同的混合速度用于優(yōu)化實驗結(jié)果,如Bindlt軟件支持5種不同的混合模式,而且不同速度之間可以進(jìn)行任意組合。此外,經(jīng)優(yōu)化設(shè)計的磁套,確保在磁頭轉(zhuǎn)移時沒有任何掛液現(xiàn)象。
4、磁珠洗脫:經(jīng)過清洗緩沖液處理的磁珠,通過磁棒轉(zhuǎn)移至盛有洗脫液的樣品管位置,進(jìn)行洗脫,其過程與釋放磁珠類似。在洗脫過程中可以選擇進(jìn)行動能洗脫或孵育。動能洗脫是指通過磁套的上下運(yùn)動,將磁珠與洗脫液充分混合接觸,配合孵育加速樣品從磁珠上釋放的過程。在洗脫時,通常采用小體積洗脫,如初始樣品200μl,洗脫液50μl,這樣通過洗脫,就可將樣品濃縮4倍,從而提高產(chǎn)物的濃度。
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