| 注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏該商鋪

行業(yè)產(chǎn)品

17321051213
當前位置:
上海喆圖科學儀器有限公司>>公司動態(tài)>>怎么用恒溫培養(yǎng)箱進行初代細胞培養(yǎng)實驗?

產(chǎn)品展示

更多
  • TRB系列搖瓶機又稱敞開式搖床,為生產(chǎn)作

  • TOS系列頂置式攪拌器是一種主要應(yīng)用于混

  • CL系列冷卻水循環(huán)機,也叫冷水機,實驗室

  • FRC系列低溫恒溫反應(yīng)槽別名低溫恒溫反應(yīng)

  • QVK、QVS、QVB系列真空氣氛爐又稱

  • 納米材料陶瓷纖維馬弗爐爐體采用陶瓷纖維材

怎么用恒溫培養(yǎng)箱進行初代細胞培養(yǎng)實驗?

閱讀:1059        發(fā)布時間:2017/8/30
分享:

細胞初代培養(yǎng)或原代培養(yǎng),是從供體獲取組織后的培養(yǎng)。其zui大優(yōu)點是:組織和細胞剛剛離體,生物性狀尚未發(fā)生很大的變化,具有二倍體遺傳性狀,在供體來源充分、生物條件穩(wěn)定的情況下(年齡、性別),在一定程度上能反映體內(nèi)狀態(tài)。

實驗方法原理:      

合成培養(yǎng)基胰蛋白酶消化培養(yǎng)法,能把組織塊分散成細胞團或單個細胞,便于細胞從培養(yǎng)液中攝取營養(yǎng)和排出代謝產(chǎn)物,細胞能較快地長成單層。

本法尤適用于培養(yǎng)大量組織,細胞產(chǎn)量高;但用于經(jīng)常性小量培養(yǎng)工作稍顯繁瑣,無菌操作不良時且易污染。

實驗材料:試劑、試劑盒 Hanks、培養(yǎng)液、胰蛋白酶

儀器、耗材:吸管、平皿、培養(yǎng)瓶、燒杯、攪拌器、三角燒瓶、不銹鋼篩、眼科剪、眼科鑷、計數(shù)板

實驗步驟:       

1.  準備

取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,紫外線消毒20 分鐘;

2.  布局

點燃酒精燈(或煤氣燈),安裝吸管帽(應(yīng)通過火焰);

3.  處理組織

把組織塊置入燒杯中,用Hanks液漂洗2~3 次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60 分鐘;

4.  剪切

用眼科剪把組織塊切成2~3 毫米大小的塊(用手術(shù)刀割亦可),以便于消化;加入比組織塊總量多30~50 倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角燒瓶中,結(jié)扎瓶口或塞以膠塞;

5.  消化

或用恒溫水浴,或置入37 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱消化均可,消化中每隔20 分鐘應(yīng)搖動一次,如用電磁恒溫攪拌器消化更好(消化前瓶中需置一無菌攪棒);消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定;

6.  分離

在消化過程中見消化液發(fā)混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊(必要時可繼續(xù)進行消化);低速(500~1000 轉(zhuǎn)/分)離心消化液5 分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養(yǎng)液(如有其它酶或EDTA 等消化,需用Hanks液洗脫一兩次后,再加入培養(yǎng)液);

7.  計數(shù)

用計數(shù)板計數(shù),如細胞懸液細胞密度過大,再補加培養(yǎng)液調(diào)整后,分裝入培養(yǎng)瓶中;對大多數(shù)細胞來說,pH 要求在7.2~7.4范圍,培養(yǎng)液呈微紅色,如顏色偏黃,說膽液體變酸,可用NaHCO3調(diào)整;

8.  培養(yǎng)

置入36.5 ℃溫箱培養(yǎng);如用CO2溫箱培養(yǎng),瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽(松口)堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時需更換新塞。

注意事項:   

1.  組織塊、胰蛋白酶、培養(yǎng)液等易受紫外線傷害的物品,在培養(yǎng)時再攜入操作野;如預(yù)先置入,需用紙張覆蓋,以免受射線影響;開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部(工作時宜挽上袖口)。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~

對比框

產(chǎn)品對比 產(chǎn)品對比 二維碼 意見反饋 在線交流
在線留言