在分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中,Western blot(蛋白質(zhì)印跡)和凝膠成像是最常見的分析手段。隨著科研需求的增加,研究人員越來越傾向選擇操作簡便、結(jié)果可靠且符合合規(guī)要求的成像系統(tǒng)。作為科學(xué)服務(wù)品牌,本文聚焦于 Invitrogen iBright 成像系統(tǒng),解釋它為何能成為實(shí)驗(yàn)室從“能用"到“好用"的升級之選。
一臺設(shè)備覆蓋核心與進(jìn)階應(yīng)用:從“凝膠成像系統(tǒng)"到“多功能成像系統(tǒng)"
iBright 提供多達(dá) 五種成像模式,涵蓋蛋白凝膠、核酸凝膠、化學(xué)發(fā)光 Western blot、熒光 Western blot,以及可混合信號的 Universal 模式;每次采集會自動記錄可見圖像,便于分子量等后續(xù)分析。這意味著它既是凝膠成像系統(tǒng),也是化學(xué)發(fā)光成像儀/WB 化學(xué)發(fā)光成像儀與熒光平臺的多功能成像系統(tǒng),顯著提升設(shè)備利用率。
| 圖像模式 | 可捕獲哪種信號? | 
| 蛋白預(yù)制膠 | 凝膠(例如,考馬斯亮藍(lán)染色、銀染)和膜(例如,麗春紅、Thermo Scientific Pierce Reversible Protein Stain)的比色染色,凝膠的熒光染色(例如,Invitrogen SYPRO Ruby 染色) | 
| 核酸凝膠 | 溴化乙錠和 Invitrogen SYBR 染色 | 
| 化學(xué)發(fā)光 Western Blot | 使用各種常用 HRP 和 AP 底物(如 Thermo Scientific SuperSignal 和 Invitrogen WesternBreeze 底物)的化學(xué)發(fā)光印跡? | 
| 熒光印跡 | 使用常用 RGB(可見光范圍)和近紅外熒光基團(tuán)(如 Invitrogen Alexa Fluor 和 Alexa Fluor Plus 偶聯(lián)物)進(jìn)行熒光染色 | 
| 通用 | 自定義模式,用于對包含多種信號的樣品進(jìn)行成像,例如化學(xué)發(fā)光、熒光、比色染色和/或可見圖像;圖像顯示類似于熒光印跡模式,允許為任意樣品添加偽彩色 | 
強(qiáng)大的攝影成像功能保證 “可發(fā)表級"圖像
· 9.1 MP 冷卻 CCD 相機(jī),在默認(rèn)與可調(diào) binning 設(shè)置下兼顧分辨率、靈敏度與成像速度,適合不同場景的數(shù)據(jù)采集。
· Smart Exposure™ 自動曝光能快速給出各通道曝光,降低過曝/欠曝風(fēng)險(xiǎn);熒光多通道會分別優(yōu)化曝光時(shí)間,減少通道間的妥協(xié)。
· Smart Range™ HDR 將一長一短兩張曝光合成為 16-bit HDR 圖像,把中高豐度與低豐度條帶同時(shí)拉進(jìn)線性范圍,實(shí)測可將檢測范圍從約 2.5 個(gè)數(shù)量級擴(kuò)展到約 3 個(gè)數(shù)量級,更利于 WB 定量與復(fù)現(xiàn)。
 
 
(圖1:檢測范圍從2.5數(shù)量級擴(kuò)展至3個(gè)數(shù)量級)
這些特性針對 WB 化學(xué)發(fā)光成像的痛點(diǎn)而生,讓“看得清、量得準(zhǔn)"成為常態(tài)。
省時(shí)高效:直觀交互與“機(jī)械級"對齊
12.1 英寸電容觸控屏配合一致的工作流,降低學(xué)習(xí)成本;自動變焦與自動對焦會根據(jù)樣品大小自動放大至合適視野(22.5×18.0 cm 視野,最高 8×),CL1500/FL1500 采用機(jī)械變焦以提升靈敏度。
更關(guān)鍵的是,CL1500/FL1500 支持 ±10° 機(jī)械式自動旋轉(zhuǎn):與“數(shù)字旋轉(zhuǎn)"不同,機(jī)械旋轉(zhuǎn)不會引入像素鋸齒,條帶邊緣更平滑,數(shù)據(jù)完整性更好。
多重?zé)晒猓阂淮紊夏ぃ卮鸶嗌飳W(xué)問題
iBright FL1500 提供 5 組激發(fā)/發(fā)射通道,一次實(shí)驗(yàn)可進(jìn)行最多四色熒光多重;列舉了 AKT/GSK-3 通路等多靶標(biāo)檢測實(shí)例,適合通路研究與近紅外(NIR)應(yīng)用。濾光片范圍與兼容染料在手冊中給出,便于方法學(xué)設(shè)計(jì)與復(fù)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)條件。熒光通道的曝光由 Smart Exposure 分別優(yōu)化,降低多重妥協(xié)的代價(jià)。
 
 
(圖2:大視野(22.5 x 18.0 cm)最多可采集 4 塊小型印跡膜或凝膠。)
圖像拍攝即分析:從儀器到軟件的一體化體驗(yàn)
iBright Analysis Software 提供桌面版(Windows/macOS)、云端版(Thermo Fisher Connect)與 Secure 安全版;支持圖庫管理、自動識別泳道/條帶、分子量估算、密度學(xué)與歸一化,批量導(dǎo)出 PDF 報(bào)告與 Excel 原始數(shù)據(jù)。對 4 張 mini 膜/膠可一次自動分析,減少重復(fù)勞動與主觀差異。
合規(guī)支持
賽默飛提供 SAE(Security, Auditing, E-signature) 方案以支持 21 CFR Part 11:賬戶與權(quán)限、密碼策略、審計(jì)日志與電子簽名均可在 SAE 管理控制臺中集中配置;配合 iBright Analysis Software—Secure 與儀器固件的 SAE 模式,形成流程級合規(guī)支持(提示:合規(guī)既含技術(shù)也含流程,仍需實(shí)驗(yàn)室 SOP 配合)。
蛋白歸一化工作流程
為了消除不均一的蛋白樣品濃度、不一致的凝膠上樣量以及從凝膠到膜的不均勻轉(zhuǎn)印所帶來的樣品變異,通常會通過比較目標(biāo)蛋白與 GAPDH、β-tubulin、β-actin 等內(nèi)部管家蛋白對照,進(jìn)行一個(gè)歸一化步驟。盡管管家蛋白過去一直是歸一化的,但比較目標(biāo)蛋白與總泳道蛋白的策略可成為更準(zhǔn)確的歸一化方法。
iBright 成像系統(tǒng)和 iBright 分析軟件提供多種定量和歸一化選項(xiàng),補(bǔ)償實(shí)驗(yàn)或樣品的變異,從而讓您找到實(shí)驗(yàn)方法。
安全與可持續(xù):用綠色 LED 替代 UV
iBright 成像系統(tǒng)采用綠色 LED 透射光源,可有效激發(fā)溴化乙錠和 SYBR Green 染料等常用 DNA 染料,同時(shí)具有更多優(yōu)點(diǎn)。
· 不使用有害的紫外線:盡管紫外光可有效激發(fā)許多熒光染料和染色劑,但紫外線會危害健康。此外,長時(shí)間暴露于紫外光可能會損傷 DNA 樣本,并影響用于下游應(yīng)用(如亞克?。┑臉悠吠暾?。
· 無汞廢物: 紫外透射燈可能含有有害物質(zhì)汞,因此在處理和處置時(shí)需要特別小心。
· 更長的使用壽命: LED 燈珠的實(shí)際使用壽命比紫外燈管長更長,因此,在儀器的使用壽命內(nèi)可以節(jié)省大量成本。
服務(wù)與支持
全系附帶 SmartStart 培訓(xùn)(CL1500/FL1500 現(xiàn)場培訓(xùn),CL750 提供數(shù)字培訓(xùn)),并提供 質(zhì)保與延保服務(wù)、AB Assurance Plan、IQ/OQ 等,幫助維持高開機(jī)率與合規(guī)文檔完備。手冊末頁給出了型號對比與訂購信息,便于按需選型與后續(xù)擴(kuò)展。
與常見替代方案的差異
· 自動化與線性范圍:Smart Exposure + Smart Range HDR 讓 WB 化學(xué)發(fā)光的線性范圍更寬;一些入門方案更依賴人工試錯,重復(fù)性不易保障。
· 數(shù)據(jù)完整性:機(jī)械旋轉(zhuǎn)避免數(shù)字旋轉(zhuǎn)的像素鋸齒,條帶更平滑;市面上多數(shù)僅提供數(shù)字旋轉(zhuǎn)或需手工重放樣品。
· 多重?zé)晒饽芰Γ?/span>FL1500 提供 5 通道、4色多重;解決了部分WB成像平臺通道數(shù)少、更換濾片或近紅外支持受限,方法學(xué)遷移成本更高。
· 合規(guī)方案:原生的 21 CFR Part 11 支持(賬戶/審計(jì)/電子簽名)減少外接或自建系統(tǒng)的不確定性。
· 安全環(huán)保:綠色 LED 替代 UV,降低對人員與樣品的潛在傷害與環(huán)保負(fù)擔(dān)。
以上差異點(diǎn)用于說明 iBright 的優(yōu)勢取向,具體對比仍需以各廠商公開規(guī)格與實(shí)驗(yàn)室既有流程為準(zhǔn)。
結(jié)論:功能強(qiáng)大易操作的 WB 與凝膠成像
如果你的目標(biāo)是:化學(xué)發(fā)光 Western blot 的高動態(tài)范圍與定量可靠性、熒光多重的一致復(fù)現(xiàn)、從數(shù)據(jù)到合規(guī)的一體化、以及更安全可持續(xù)的日常操作,那么 iBright 成像系統(tǒng)提供的硬件、算法、軟件與服務(wù)組合,能在科研真實(shí)場景中落到實(shí)處。這也是為什么越來越多團(tuán)隊(duì)把 iBright 作為從凝膠成像系統(tǒng)到多功能成像系統(tǒng)的升級之選,并把它用作日常的 WB 化學(xué)發(fā)光成像儀。
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