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諾博萊德 葉綠體蛋白提取試劑盒

NobleRyder P5058 葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

產(chǎn)品貨號：P5058

產(chǎn)品名稱：葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

葉綠體蛋白提取試劑盒-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

規(guī)格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5058 葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

葉綠體是植物細(xì)胞所te有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的,由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對象。葉綠體提取試劑盒用簡便快速的方法即可從各種植物樣本中快速提取得到葉綠體總蛋白。本試劑盒適用于提取新鮮植物樣本的葉綠體蛋白，用于凍存樣本的提取時由于凍存過程中大部分葉綠體會被破壞，葉綠體蛋白回收率較低。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解葉綠體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒采用酶法提取，酶法提取制備的葉綠體，回收率提高，純度高，但是耗時較長。非酶法的提取試劑盒提取過程簡單方便，速度快，可在1小時內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：植物

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

葉綠體是植物細(xì)胞所te有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的, 由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對象。

葉綠體蛋白提取試劑盒用簡便快速的方法即可從各種植物樣本中快速提取得到葉綠體總蛋白。

本試劑盒適用于提取新鮮植物樣本的葉綠體蛋白，用于凍存樣本的提取時由于凍存過程中大部分葉綠體會被破壞，葉綠體蛋白回收率較低。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解葉綠體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒采用酶法提取，酶法提取制備的葉綠體，回收率提高，純度高，但是耗時較長。非酶法的提取試劑盒提取過程簡單方便，速度快，可在 1 小時內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白也用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含 SDS、TritonX-100、chaps 等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含 AEBSF，可以避免由于 AEBSF 導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(Mass Spectrometry, MS)檢測和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套、100um 細(xì)胞篩。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

二、葉綠體蛋白提?。?/span>

1. 提取液準(zhǔn)備：

將試劑 C1 和試劑 C2 混合，配成蛋白提取液 C，充分混勻備用。每 500ul 蛋白提取液 C 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 蛋白提取液 C 置 4℃保存，長期不用的可以分裝后-20℃保存。

2) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

3) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2. 取 1g 新鮮植物樣本葉片，洗凈擦干后去除葉梗和粗脈。用手術(shù)jian刀盡可能剪碎。

3. 加入 2ml PBS 用組織攪碎機(jī)/勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿。

4. 將勻漿用 100um 細(xì)胞篩過濾。

【注】：

1) 沒有細(xì)胞篩的話，在 4℃，稍微靜置，讓粗纖維，成團(tuán)組織塊等沉降，收集細(xì)胞上清，棄組織沉淀。

2) 有些含黏液較多的樣品可能難以吸取，可以將 1ml 吸頭尖稍微剪掉一點(diǎn)使用。

5. 將濾液在 3000×g 條件下離心 10 分鐘，收集沉淀。

6. 在沉淀中加入 500ul 提取液 A，充分混勻

【注】：

1) 培養(yǎng)細(xì)胞可以在 1000×g 條件下離心 5 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)

胞后用 PBS 洗滌 2 次，然后直接加入提取液 A 重懸。

2) 大約每 300ul 細(xì)胞壓積（沉淀體積）中加入 1ml 提取液 A。

7. 將懸液置振蕩器上 37℃或室溫振蕩 12-72 小時。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保證提取液能輕微晃動即可。

2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時用移液器吹打混勻即可。

3) 根據(jù)下游葉綠體的應(yīng)用選擇合適的溫度。最高可以至 55℃，提高溫度至 55℃可以縮短試劑 A 處理時間。

4) 不同類型的植物樣本需要處理的時間差異較大。擬南芥較易處理，鮮嫩葉片較易處理，年齡小的樣本處理時間短。

5) 部分細(xì)胞壁較厚的植物類型可能需要處理更長時間?？梢匝娱L至 72 小時以上處理以提高葉綠體得率。

8. 在 3000×g 條件下離心 10 分鐘，棄上清，收集沉淀。

9. 在沉淀中加入 0.5ml 提取液 B，充分混勻。

10. 置振蕩器振蕩 20 分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保證提取液能輕微晃動即可。

2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻

即可。

11. 在 200×g 力離心 2 分鐘。棄沉淀，取上清。

12. 在 800×g 力離心 2 分鐘。棄沉淀，取上清。

13. 將上清 3000×g 力離心 10 分鐘。棄上清，收集沉淀。

14. 在沉淀中加入 100-400ul 葉綠體蛋白提取液 C，充分混勻。

【注】：

1) 每 500ul 蛋白提取液 C 加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物。

15. 在 4℃條件下振蕩 20-30 分鐘。

【注】：

1) 試劑 C 處理時間根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整。至葉綠體充分裂解，離心后無明顯大量葉綠體沉淀。

16. 在 4℃，12000×g 條件下離心 15 分鐘。

17. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到葉綠體總蛋白。

18. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

19. 將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于不能含有去污劑/鹽的下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 蛋白樣品中含有鹽，需要脫鹽處理后用于雙向電泳。

2) 經(jīng)透析或脫鹽離心柱處理的蛋白樣品不含有去垢劑和高濃度鹽。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹di清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

7. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

8. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸；如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

葉綠體蛋白提取試劑盒-常備現(xiàn)貨

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