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諾博萊德 溶酶體提取試劑盒 蛋白提取

NobleRyder P5107 溶酶體提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：P5107

產(chǎn)品名稱(chēng)：溶酶體提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱(chēng)：溶酶體提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5107 溶酶體提取試劑盒

溶酶體是由一層單位膜包圍，內(nèi)含多種酸性水解酶的泡狀結(jié)構(gòu)。溶酶體含有40多種水解酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是對(duì)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的消化作用。此外溶酶體與器官形成、激素分泌的調(diào)節(jié)以及某些疾病的發(fā)生密切相關(guān)。溶酶體提取試劑盒可用于各種動(dòng)物細(xì)胞和實(shí)體軟、硬組織樣本的溶酶體提取。提取的溶酶體具有生物活性，可以用于溶酶體功能研究、溶酶體染色、溶酶體蛋白提取等各種下游應(yīng)用?？梢蕴峁┽槍?duì)動(dòng)物細(xì)胞、組織、植物、真菌、酵母、微生物、藻類(lèi)、液體、土壤等各種不同樣本的蛋白提取試劑盒?？梢蕴峁┽槍?duì)細(xì)胞膜、核、胞質(zhì)、線粒體、溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、外泌體等細(xì)胞不同部位的蛋白提取試劑盒。

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞/組織

注：

1. 提取液長(zhǎng)期不用時(shí)置于-20℃保存。

2. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

溶酶體是由一層單位膜包圍，內(nèi)含多種酸性水解酶的泡狀結(jié)構(gòu)。溶酶體含有 40 多種水解酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是對(duì)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的消化作用。此外溶酶體與器官形成、激素分泌的調(diào)節(jié)以及某些疾病的發(fā)生密切相關(guān)。

溶酶體提取試劑盒可用于各種動(dòng)物細(xì)胞和實(shí)體軟、硬組織樣本的溶酶體提取。提取的溶酶體具有生物活性，可以用于溶酶體功能研究、溶酶體染色、溶酶體蛋白 提取等各種下游應(yīng)用。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、離心管、吸頭、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

3. 最好使用 Dounce 勻漿器勻漿，如果沒(méi)有 Dounce 勻漿器，也可用普通玻璃勻漿器勻漿，但是溶酶體回收率會(huì)下降。

4. 若實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)較小達(dá)不到 30000×g 離心力，或者離心管質(zhì)量不能承受 30000×g 離心力，請(qǐng)使用能達(dá)到的最大離心力。

二、細(xì)胞溶酶體提?。?/span>

1. 取 1-2×10⁷ 個(gè)細(xì)胞，在 4℃，500×g 條件下離心 5 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞；

【注】：

1) 貼壁培養(yǎng)細(xì)胞用yi酶消化下來(lái)或者用刮刀刮取均可。

2. 用冷 PBS 洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

【注】：

1) PBS 重懸細(xì)胞，300×g -500×g，2-8°C，離心時(shí)間 5 分鐘收集細(xì)胞。

3. 加入 400 μl 冷的試劑 A，置冰上靜置 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器勻漿 30-40 下。

【注】：

1) 先用 Dounce 勻漿器的松型槌初步勻漿 10-20 次，再用緊型槌勻漿 20-30 次。

2) 每上下一個(gè)來(lái)回為一次。

5. 勻漿液在 4℃，1000×g 力條件下離心 5 分鐘。棄沉淀，收集上清。

6. 將上清在 4℃，3000×g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在 4℃，5000×g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。

8. 將上清在 4℃，20000-30000×g 力條件下離心 20 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1) 如果用大的離心轉(zhuǎn)頭，液體量太少不好離心的話，可以將小離心管套入大離心管使用，或者添加 PBS 增加液體量。

2) 若實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)較小達(dá)不到 20000×g 離心力，或者離心管質(zhì)量不能承受 20000×g 離心力，請(qǐng)使用能達(dá)到的最大離心力，只要在 16000×g 以上，也能獲得較好的回收率。

9. 在沉淀中加入 400 μl 冷的試劑 B，混勻。

10. 在 4℃，20000-30000×g 力條件下離心 20 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1) 如果用大的離心轉(zhuǎn)頭，液體量太少不好離心的話，可以將小離心管套入大離心管使用，或者添加 PBS 增加液體量。

2) 若實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)較小達(dá)不到 20000×g 離心力，或者離心管質(zhì)量不能承受 20000×g 離心力，請(qǐng)使用能達(dá)到的最大離心力，只要在 16000×g 以上，也能獲得較好的回收率。

11. 沉淀用溶酶體保存液 C 重懸。

【注】：

1) 也可以不用試劑 C，直接根據(jù)下游應(yīng)用用合適的緩沖液重懸保存或直接用于下游蛋白提取等實(shí)驗(yàn)。

12. 即得到溶酶體樣品，置冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

三、組織溶酶體提?。?/span>

1. 取 50-100 mg 新鮮動(dòng)物組織樣本，用 PBS 清洗干凈。

2. 用手術(shù)jian刀盡可能剪碎，用冷 PBS 洗滌兩次。

3. 加入 400 μl 冷的試劑 A，置冰上靜置 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器勻漿 30-40 下。

【注】：

1) 先用 Dounce 勻漿器的松型槌初步勻漿 10-20 次，再用緊型槌勻漿 20-30 次。

2) 每上下一個(gè)來(lái)回為一次。

5. 勻漿液在 4℃，1000×g 力條件下離心 5 分鐘。棄沉淀，收集上清。

6. 將上清在 4℃，3000×g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在 4℃，5000×g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。

8. 將上清在 4℃，20000-30000×g 力條件下離心 20 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1) 如果用大的離心轉(zhuǎn)頭，液體量太少不好離心的話，可以將小離心管套入大離心管使用，或者添加 PBS 增加液體量。

2) 若實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)較小達(dá)不到 20000×g 離心力，或者離心管質(zhì)量不能承受 20000×g 離心力，請(qǐng)使用能達(dá)到的最大離心力，只要在 16000×g 以上，也能獲得較好的回收率。

9. 在沉淀中加入 400 μl 冷的試劑 B，混勻。

10. 在 4℃，20000-30000×g 力條件下離心 20 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1) 如果用大的離心轉(zhuǎn)頭，液體量太少不好離心的話，可以將小離心管套入大離心管使用，或者添加 PBS 增加液體量。

2) 若實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)較小達(dá)不到 20000×g 離心力，或者離心管質(zhì)量不能承受 20000×g 離心力，請(qǐng)使用能達(dá)到的最大離心力，只要在 16000×g 以上，也能獲得較好的回收率。

11. 沉淀用溶酶體保存液 C 重懸。

【注】：

1) 也可以不用試劑 C，直接根據(jù)下游應(yīng)用用合適的緩沖液重懸保存或直接用于下游蛋白提取等實(shí)驗(yàn)。

12. 即得到溶酶體樣品，置冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹di清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

7. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

8. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

9. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

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產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

P5107  溶酶體提取試劑盒  50T/100T