超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒 抗逆 返回列表頁(yè)

NobleRyder BC8953超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒 Superoxide Dismutase(SOD) Activity Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC8953

產(chǎn)品名稱：超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒 Superoxide Dismutase(SOD) Activity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100T/48S

超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒 抗逆

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒

英文名稱：Superoxide Dismutase(SOD) Activity Assay Kit

規(guī)格：100T/48S

檢測(cè)方法：微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader

儲(chǔ)存條件：Store at 2-8℃，6 months

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder BC8953超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒 Superoxide Dismutase(SOD) Activity Assay Kit

SOD（EC 1.15.1.1）是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶，是重要的氧自由基清除劑，能催化超氧化物陰離子發(fā)生歧化作用，生成H₂O₂和O₂。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是H₂O₂主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

通過(guò)黃piao呤及黃piao呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)，O2-可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜，后者在560nm處有吸收；SOD可清除O2-，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液藍(lán)色越深，說(shuō)明SOD活性愈低，反之活性越高。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn))

1.細(xì)胞、細(xì)菌樣本：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎(功率200w，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次)。8000g4C離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

2.組織樣本：按照組織質(zhì)量(g)：提取液體積(mL)為1：5-10的比例(建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液)，進(jìn)行冰浴勻漿：8000g4℃離心10min，取上靖，置冰上待測(cè)。

3.血清(漿)樣本：直接檢測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至560nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2.臨用前根據(jù)樣本數(shù)量取部分試劑一、試劑三和試劑四工作液37℃水浴5min 以上。

三、SOD活性計(jì)算

1、抑制百分率的計(jì)算

抑制百分率=(ΔA空白-△A測(cè)定)÷△A空白x100%

盡量使樣本的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)，越靠近50%越準(zhǔn)確。如果計(jì)算出來(lái)的抑制百分率小于30%或大于70%，則通常需要調(diào)整加樣量后重新測(cè)定。如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣本;如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏低,則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測(cè)樣本或者提高操作表中樣本體積,同時(shí)減少相同的蒸餾水體積。

2、SOD酶活性單位：在1mL體系中，上述黃piao呤氧化酶偶聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50%時(shí)，反應(yīng)體系中的 SOD酶活性定義為一個(gè)酶活性單位。

3、SOD酶活性計(jì)算：

(1)血清(漿)SOD活性(U/mL)=[抑制百分率+(1-抑制百分率)xV 反總]+1mL÷V 樣xF

=10x抑制百分率÷(1-抑制百分率)xF

(2)組織、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞SOD活性計(jì)算：

a.按樣本蛋白濃度計(jì)算

SOD活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)xV 反總]+1mL +(V 樣xCpr)xF

=10x抑制百分率+(1-抑制百分率)÷CprxF

b.按樣本質(zhì)量計(jì)算

SOD活性(U/g質(zhì)量)=[抑制百分率+(1-抑制百分率)xV 反總]+1mL +(WxV 樣+V 樣總)xF

=10x抑制百分率+(1-抑制百分率)÷WxF

c.按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

SOD活性(U/10⁴cell)=[抑制百分率+(1-抑制百分率)xV 反總]+1mL+(NxV 樣+V 樣總)xF

=10x抑制百分率+(1-抑制百分率)xF÷N

V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL;V樣：加入反應(yīng)體系中的樣本體積，0.02mL;V樣總：加入提取液體積1mL：

Cpr：蛋白樣本濃度，mg/mL：W：樣本質(zhì)量，g;N：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，以萬(wàn)計(jì);F：樣本稀釋倍數(shù)：1mL：1mL反應(yīng)體系。

注意事項(xiàng)：

1、樣本和試劑二工作液使用時(shí)在冰上放置。

2、樣本較多時(shí)，可按表格配制測(cè)定管工作液和對(duì)照管工作液(包含試劑一、(試劑二工作液)、試劑三、蒸餾水)，試劑四工作液必須最后加入。

3、反應(yīng)完成后，可能有沉淀生成，混勻后測(cè)定即可。

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