幾丁質(zhì)酶試劑盒 糖代謝 返回列表頁

幾丁質(zhì)酶（Chitinase）試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

幾丁質(zhì)酶試劑盒 糖代謝

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細胞壁中。而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點。

測定原理：

幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，進一步與對二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物，在 585nm處有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。

組成：

試劑二：液體 5ml×1 瓶，4℃保存。（若出現(xiàn)結(jié)晶，可 80℃左右加熱溶解后使用）

自備儀器和用品：

天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯（土壤樣品專用）和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 20min，取上清，置冰上待測。

真菌：按照細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 20min，取上清置于冰上待測。

培養(yǎng)液：直接測定。

測定操作表：

計算公式：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.3088-0.003，R2=0.9995

計算公式：

1、按照樣本重量計算

酶活性定義：37℃條件下，每克組織每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h/g 鮮重）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T

=8.096×（ΔA +0.003）÷W

2、按照蛋白質(zhì)濃度計算

酶活定義：37℃條件下，每毫克蛋白每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。幾丁質(zhì)酶活性（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 8.096×（ΔA +0.003）÷Cpr

3、按細胞數(shù)量計算

酶活定義：37℃條件下，每 104 個細胞每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量)

=8.096×（ΔA +0.003）÷細胞數(shù)量

4、按液體體積計算

酶活定義：37℃條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /ml）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷V 樣=8.096×（ΔA +0.003）

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1ml；V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.4ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml

用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.1544x-0.003，R2=0.9995

計算公式：

4、按照樣本重量計算

酶活性定義：37℃條件下，每克組織每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h/g 鮮重）=（ΔA+0.003）÷0.1544×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T

=16.192×（ΔA +0.003）÷W

5、按照蛋白質(zhì)濃度計算

酶活定義：37℃條件下，每毫克蛋白每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。幾丁質(zhì)酶活性（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 16.192×（ΔA +0.003）÷Cpr

6、按細胞數(shù)量計算

酶活定義：37℃條件下，每 104 個細胞每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量)

=16.192×（ΔA +0.003）÷細胞數(shù)量

4、按液體體積計算

酶活定義：37℃條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /ml）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷V 樣=16.192×（ΔA +0.003）

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1ml；V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.4ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml

注意事項：

1、反應(yīng)結(jié)束后立即進行比色。

2、試劑四有一定的毒性，請操作時做好防護措施。

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