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土壤酸性蛋白酶（Solid -Acid Protease，S-ACPT）試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/24 樣

土壤酸性蛋白酶試劑盒

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。S-ACPT 在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。

測(cè)定原理：

酸性條件下，S-ACPT 可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪an酸；在堿性條件下，酪an酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)；在 680nm 有特征吸收峰。

試劑組成和配置：

試劑一的配制：臨用前按液體一：液體二：蒸餾水=140（μl）：20（μl）：21（ml）的比例配制，現(xiàn)配現(xiàn)用，如出現(xiàn)白色絮狀沉淀則不能用。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 6ml 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 2ml 試劑七，沸水浴加熱溶解，然后加入 8ml 試劑一，充分混勻備用，用不完的試劑 4℃保存；

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 40ml 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；試劑六：液體 1.5ml×1 支，0.05mg/ml 標(biāo)準(zhǔn)酪an酸溶液，4℃保存；

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、1ml 玻璃比色皿、蒸餾水

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過(guò) 30~50 目篩。

測(cè)定步驟：

1、試劑一的配制：見(jiàn)試劑的組成和配制。

2、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 680nm，蒸餾水調(diào)零。

3、樣本測(cè)定：

混勻后，40℃水浴 30min，振蕩 5-6 次，使土樣與反應(yīng)液充分接觸：混勻，8000g 25℃離心 10min，取上清液，在EP 管中加入下列試劑

混勻，40℃水浴 20min，8000g 25℃離心 10min，取上清液，680nm 下讀取各管吸光值A。

注意事項(xiàng)

標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)一次。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

S-ACPT 活性計(jì)算：

單位定義：每天每g 土樣中產(chǎn)生 1mg 酪an酸為一個(gè) S-ACPT 活力單位。

S-ACPT(mg/d/g 土樣)=C 標(biāo)準(zhǔn)×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 反總÷W÷T=24×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷A 標(biāo)準(zhǔn)管

C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.05mg/ml；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.4ml；T：反應(yīng)時(shí)間，30min=1/48d；

W：樣本質(zhì)量，0.04g。

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