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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶試劑盒

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

S-NAG 是溶酶體中的一種酸性水解酶，由土壤微生物分泌。S-NAG 活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。

測定原理：

S-NAG 分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基ben酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算NAG 活性。

試劑組成和配制：

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 10ml 蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 400nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表：

混勻， 37℃振蕩反應(yīng) 1h 后，90℃水浴 5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻， 10000g 25℃離心 10min，取上清液（在 EP 管或 96 孔板中加入下列試劑）；

充分混勻，室溫靜置 2min 后， 400nm 處測定吸光值A(chǔ)，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設(shè)

一個對照管。

S-NAG 活力計算：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.00645x -0.0054；x 為標準品濃度（μmol/L），y 為吸光值。單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1 μmol 對-硝基ben酚定義為一個酶活力單位。

S-NAG 活力（μmol/d/g 土樣）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V 反總÷W÷T =55.81×(ΔA+0.0054)

T：反應(yīng)時間，1h=1/24d； V 反總：反應(yīng)體系總體積：3×10-4 L；W：樣本質(zhì)量，0.02g。

用 96 孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0043x -0.0054；x 為標準品濃度（μmol/L），y 為吸光值。單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1 μmol 對-硝基ben酚定義為一個酶活力單位。

S-NAG 活力（μmol/d/g 土樣）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.0043×V 反總÷W÷T =83.72×(ΔA+0.0054)

T：反應(yīng)時間，1h=1/24d； V 反總：反應(yīng)體系總體積：3×10-4 L；W：樣本質(zhì)量，0.02g。mol/mg prot

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