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諾博萊德 2×Pfu PCR Master Mix（含染料）

2× PFU PCR Master Mix(含染料)

目錄號(hào)：71111

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存，有效期 2 年。經(jīng)常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 個(gè)月。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

本產(chǎn)品包含Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液，濃度為2×。 保真度是Taq酶的54倍，用于高保真PCR反應(yīng)、復(fù)雜模板如GC含量高(>60%)， 有二級(jí)結(jié)構(gòu)等的擴(kuò)增和大規(guī)模的基因檢測。

PCR產(chǎn)物為平末端，純化后可直接用于Blunt載體克隆（Cat#V116、 V117）。

本產(chǎn)品含紅色示蹤染料，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進(jìn)行電泳；也可經(jīng)過純化處理，以用于酶切、連接、測序等后續(xù)操作。

適用范圍：

高保真DNA擴(kuò)增:如表達(dá)基因的克隆、基因的定點(diǎn)突變、細(xì)胞內(nèi)基因點(diǎn)突變的分析(SNP)和末端補(bǔ)平。

基因檢測：適合大規(guī)?；驒z測，半定量PCR實(shí)驗(yàn)和微量DNA的檢測。

產(chǎn)品特點(diǎn)

具有快速簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可最大限度的減少人為誤差。

{C}2   × Pfu PCR Master Mix 使用說明：

一、配制 PCR 反應(yīng)體系：(于冰上配制)

參考模板用量（50 μl 反應(yīng)體系）：

質(zhì)粒：0.1-10 ng；細(xì)菌基因組：10-100 ng；人類基因組：50-150 ng；cDNA：1-5 μl 。

二、建議 PCR 循環(huán)條件：

注意：如果擴(kuò)增片段≤4 kb，建議延伸速度為 1kb / min；片段＞4 kb，建議 0.5kb / min。

注意事項(xiàng)：

a. Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性，所以Pfu酶擴(kuò)增時(shí)延伸速度比Taq酶低，應(yīng)根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的長度設(shè)置相應(yīng)的延伸時(shí)間，如果擴(kuò)增片段小于4 kb，建議Pfu酶的延伸速度為1kb/ min；如果擴(kuò)增片段大于4 kb，建議延伸速度為0.5kb / min。同時(shí)Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物， 所以應(yīng)先加dNTP后，再加Pfu酶到反應(yīng)體系中，并立即進(jìn)行PCR反應(yīng)。

b. 用Pfu酶擴(kuò)增時(shí)，引物的純度要求較高，引物長度大于18個(gè)堿基，Tm在55－80℃ 之間，引物濃度在0.1-0.5 μM之間，比Taq酶略高。

c. Pfu酶的熱穩(wěn)定性比Taq酶好，對(duì)于GC含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃，對(duì)Pfu酶的活性無影響。

三、結(jié)果檢測：反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。

2×Pfu PCR Master Mix（含染料）