E.G7-OVA 小鼠 T 淋巴瘤細胞

E.G7-OVA 小鼠 T 淋巴瘤細胞

E.G7-Ova

細胞鑒定種屬鑒定

細胞來源國家資源庫

細胞背景來源于 C57BL/ 6（H-2 b）小鼠淋巴瘤細胞系 EL4（見 BCRC 60179），EL4 細胞通過電穿孔轉染質粒 pAc-neo-OVA，質粒 pAc-neo-OVA 攜帶雞卵清蛋白（OVA）mRNA 和新霉素（G418）抗性基因的完整 拷貝;E.G7-OVA 細胞含有插入質粒的單個拷貝，并組成性地合成和分泌 OVA;用 E.G57-OVA 細胞免疫的 C6BL/ 7 小鼠產(chǎn)生對 OVA 2-258 肽特異性的 H-276 Kb 限制性細胞毒性淋巴細胞;該細胞系是研究小鼠細胞毒性 T 淋巴細胞主要組織相容性復合體（MHC）I 類限制反應的模型系統(tǒng)。

細胞特性形態(tài)：淋巴母細胞，懸浮生長

用途：僅供科研使用。

培養(yǎng)條件1）準備 1640 培養(yǎng)基與 2 mM L-谷氨酰胺調整為含有 1.5 g/ L 碳酸氫鈉，4.5 g/ L 葡萄糖，10 mM HEPES 和 1.0 mM 丙酮酸鈉，并添加 0.05 mM 2-Mercaptoethanol和 0.4 mg/ ml G418，90%;胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5% 。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。

注意事項常溫發(fā)貨：收到后 T25 瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置 2-3 小時后觀察密度和狀態(tài)拍照 2-3 張反饋給銷售， 密度達標就可以傳代。前期傳代比例 1:2 ，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成 1 個 1ml 凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復凍存 2-3 只后才擴增做實驗，以防突發(fā)情況引起斷種。

干冰發(fā)貨：常規(guī)細胞發(fā)貨凍存管 2 只，復蘇 1 只，另外一只備用，第一個復蘇不成功時嚴格按照廠家要求復蘇第二個，均沒有復蘇成功的情況即時留存復蘇照片通知銷售。

貼壁細胞參考：

1.  棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2.  加入 0.25％（w / v ）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min ，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將 細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養(yǎng)皿中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2~1:5 的比例進行。

3）細胞凍存:  收到細胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

4）運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

懸浮細胞參考：

懸浮狀態(tài)下生長的細胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般情況下 細胞密度維持在 1×105~1×106 個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如 需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中 1000rpm ，離心 5min ，棄去上清，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后重 懸混勻后將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2~1:4 的比例進行。

細胞培養(yǎng)：

1）凍存細胞的復蘇：

將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含 4-6mL 培養(yǎng)基的離心管 中混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 3-5min ，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸 液加入含 6-8ml 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中 37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達 70%-90% ，即可進行傳代培養(yǎng)。

此細胞為懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

懸浮狀態(tài)下生長的細胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般情況下 細胞密度維持在 1×105~1×106 個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如 需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中 1000rpm ，離心 5min ，棄去上清，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后重 懸混勻后將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2~1:5 的比例進行。

3） 細胞凍存:  收到細胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

運輸形式： 低溫：1mL 凍存管包裝干冰運輸，收到后-80 度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫: T25 瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

生物安全： 1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

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