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當(dāng)前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>樣本采集與制備>>樣本裂解>> P4817Triton-SDS細(xì)胞裂解液 樣本裂解
參 考 價(jià) | 面議 |
產(chǎn)品型號(hào)P4817
品 牌NobleRyder/諾博萊德
廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
所 在 地北京市
更新時(shí)間:2025-03-15 10:40:48瀏覽次數(shù):30次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 化工儀器網(wǎng)羅米地辛/Romidepsin Depsipeptide樣本裂解
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100ml |
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貨號(hào) | P4817 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
主要用途 | 可以有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用 |
諾博萊德 Triton-SDS細(xì)胞裂解液
Triton-SDS細(xì)胞裂解液 樣本裂解
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
Triton-SDS細(xì)胞裂解液由 Triton X-100、SDS、Tris-HCl等組成,并含有蛋白酶抑制劑成分,可以有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用。作用原理是利用Triton X-100破壞脂質(zhì)雙分子層,溶解胞質(zhì)和細(xì)胞膜,破壞分子間微弱結(jié)合鍵的大部分蛋白質(zhì)抗原。其濃度在0.1%~1%時(shí)即可滿足幾乎所有溶解的需求,且可補(bǔ)充等離子濃度的鹽及使pH接近中性。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于PAGE電泳,Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。不宜用Bradford法測(cè)定由Triton-SDS細(xì)胞裂解液獲得樣本的蛋白濃度。
產(chǎn)品組成:
編號(hào) 名稱 | P4817 | Storage |
Triton-SDS Lysis Buffer | 100ml | -20℃ |
PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
使用說明書 | 1份 |
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
操作步驟(僅供參考):
(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
取Triton-SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻,加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。
去除培養(yǎng)液,用PBS、NS或無血清培養(yǎng)液清洗1次,低速離心,棄上清,留取沉淀。
按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例加入riton-SDS Lysis Buffer。移液器輕輕吹打,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解,通常裂解液作用于細(xì)胞1~3s內(nèi),細(xì)胞就會(huì)被裂解。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200~250μl。
10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。
進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
取Triton-SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。
低速離心懸浮細(xì)胞,棄上清,收集沉淀。
用手指輕彈細(xì)胞,使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入Triton-SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200~250μl。
10000~12000g, 4℃離心5~10min(如無低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。
進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)組織樣本
取Triton-SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。
把組zhi剪切成細(xì)小的碎片,越小越好。
取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織,迅速用液氮研磨,研磨過程盡量控制在1~2min之內(nèi),以減少蛋白的降解。
按照每20mg組織加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15~30min。
步驟3、4亦可以采用如下過程:按照每20mg組織加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Triton-SDS Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,直至充分裂解,該過程盡量控制在1~2min之內(nèi),以減少蛋白的降解。
10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。
進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事項(xiàng):
去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后,如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不用清洗。
如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50~100萬細(xì)胞/離心管,然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分,而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸,相對(duì)比較容易裂解充分。
如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
溶解Triton-SDS Lysis Buffer時(shí),應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間,避免裂解液中的有效成分失效。
裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞裂解的操作步驟,應(yīng)置于冰上或4℃進(jìn)行。
Triton-SDS細(xì)胞裂解液 樣本裂解
有效期: 12個(gè)月有效。
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