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細(xì)胞核蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

NobleRyder  EX9258 細(xì)胞核蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：EX9258

產(chǎn)品名稱：細(xì)胞核蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T /100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：細(xì)胞核蛋白提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder  EX9258 細(xì)胞核蛋白提取試劑盒產(chǎn)品介紹

細(xì)胞核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動(dòng)物細(xì)胞等動(dòng)物細(xì)胞中提取核蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀、酶活性測(cè)定等蛋白研究。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心 管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便，從細(xì)胞中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2. 將蛋白提取的時(shí)間縮短至 30 分鐘-1 小時(shí)。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 7種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸 酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

6. Western 實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用 Lamin B、TBP、Histon H3。

二、細(xì)胞核蛋白提?。?

1. 提取液制備： 每 200μl 冷的蛋白提取液 B 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物和 2μl 磷酸酶抑制劑混合物， 混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入 提取液。磷酸酶抑制劑可以一次加入。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取 5-10×10 6個(gè)細(xì)胞，在 4℃，500×g 條件下離心 5 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干， 收集細(xì)胞。

3. 用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 每 20μl 體積細(xì)胞沉淀（約 20mg，2×10 6個(gè)細(xì)胞）中加入 200-300μl 冷的提取液 A，高速渦 旋振蕩混勻或充分吹打混勻，置 2-8℃條件振蕩 10-30 分鐘。

【注】：

1) 提取液 A 處理后細(xì)胞體積應(yīng)減少，否則延長(zhǎng)提取液 A 振蕩處理時(shí)間。

2) 如果需要同時(shí)收集胞質(zhì)蛋白，可以稍微減少試劑 A 的用量，以提高獲得的胞質(zhì)蛋白樣 品的濃度。

3) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

4) 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器 吹打混勻即可。

5. 然后在 4℃，2000×g 條件下離心 5 分鐘。

6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請(qǐng)置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

7. 沉淀用 PBS 重懸，在 4℃，5000×g 條件下離心5分鐘，棄上清，留沉淀。

8. 在沉淀中加入 80-200μl 冷的提取液 B，高速渦旋振蕩 15 秒。

【注】：

1) 加提取液 B 前，必須盡可能吸干提取液 A。否則會(huì)影響核蛋白純度。

2) 也可以用 PBS 將沉淀洗滌一次。PBS 重懸沉淀，12000g 離心 5 分鐘。

3) 提取液 B 用量根據(jù)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞數(shù)量情況調(diào)整，細(xì)胞數(shù)量多則多加。也可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)最終蛋白濃度實(shí)際情況調(diào)整。

9. 置 2-8℃條件振蕩 30-40 分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

3) 此步驟蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的蛋白復(fù)合物。不檢測(cè)和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理，300 w/10 秒間隔10 秒，超聲 3 分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時(shí)，不必進(jìn)行超聲處理。如果引入其他外源性蛋白質(zhì)不影響下游實(shí)驗(yàn)的話，也可以加入 DNase 處理。

10. 在 4℃，12000×g 條件下離心 10 分鐘。

11. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

12. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底， 避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

7. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

8. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸；如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗

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