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酵母總蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

NobleRyder  BC1568 酵母總蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：BC1568

產(chǎn)品名稱：酵母總蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：酵母總蛋白提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲(chǔ)存條件：-20℃，avoid light，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品介紹

酵母蛋白提取試劑盒含有EDTA，山梨chun和蝸牛酶，蛋白酶抑制劑。蝸牛酶在合適的等滲體系中消化酵母的細(xì)胞壁，再用等滲液沖洗后，用含有蛋白酶抑制劑和溫和去污劑的低滲緩沖液進(jìn)行反復(fù)凍溶，促進(jìn)細(xì)胞破裂，從而釋放蛋白質(zhì)。本產(chǎn)品是含Tris、EDTA、NaCl、DTT和蛋白酶抑制劑等成分的緩沖液體系，保留了蛋白的生物學(xué)特性和功能。

應(yīng)用

適用于重組蛋白或酵母蛋白的活性提取，可用于Western Blot、免疫沉淀、蛋白活性檢測(cè)等。為1倍的緩沖液，可以處理1,000 mg濕重酵母。

操作步驟（僅供參考）：

注：β-巰基還原劑，蛋白酶抑制劑（100×），PMSF（100X）這幾個(gè)試劑使用前先用掌上離心機(jī)進(jìn)行離心。

1、收集 OD600 = 1.0 酵母菌體，4℃，12000rpm 離心 5min ,棄去上清液。

2、將菌體稱重，按照比例（50mg：500 µL）向沉淀中加入 500 µL 破壁溶液Ⅰ，重懸菌體，冰上孵 育 5min。

3、4℃，12000rpm 離心 2min，棄去上清，向沉淀中加入 500 µL 破壁溶液Ⅱ，重懸菌體，冰上孵育 5min。

4、在 500 µL 的裂解液中加入 5 µLPMSF，5 µL 蛋白酶抑制劑和 12.5 µL β-巰基還原劑；混勻，放置在冰上備用(根據(jù)實(shí)際用量準(zhǔn)備適量裂解液），現(xiàn)用現(xiàn)配。

5、4℃，12000rpm 離心 2min,棄去上清，向沉淀中加入 500 µL 上述提前備好的裂解液重懸菌液。室 溫震蕩 40min~60min，或者煮沸 5min。

6、裂解結(jié)束后，4 ℃ ，12000rpm 離心 10min。收集上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng):

1、裂解液在低溫條件下可能會(huì)出現(xiàn)沉淀析出現(xiàn)象，37 度水浴加熱至沉淀wan全溶解再使用。

2、β-巰基還原劑低溫狀態(tài)下可能比較粘稠，可恢復(fù)室溫后使用。

3、提取后的蛋白溶液中含有還原劑，如果要測(cè)濃度，請(qǐng)先沉淀蛋白，然后用 PBS 重新溶解蛋白后 再進(jìn)行測(cè)定，否則會(huì)影響結(jié)果。

4、按照每 50 mg 濕重加 500 µL 的破壁溶液和裂解液，菌體的量不能夠過(guò)多,否則會(huì)使的菌體裂解不 充分。

5、裂解后的酵母菌蛋白液,應(yīng)在-80℃的冰箱中保存。

6、裂解液中鹽離子濃度較高，必要時(shí)可除鹽后使用。

7、如果提取磷酸化蛋白，需要加入磷酸酶抑制劑。

8、本試劑只能夠用于體外實(shí)驗(yàn)科研實(shí)驗(yàn)，不能夠用于臨床、治療和動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)等，由此產(chǎn)生的后果，概不承擔(dān)責(zé)任。

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