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去內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒 質(zhì)粒提取

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具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號D9938

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地北京市

更新時間:2025-03-17 13:53:50瀏覽次數(shù):18次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 10T
貨號 D9938 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥
主要用途 用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染等要求較高的實驗,以及其他各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、連接
產(chǎn)品貨號:D9938
產(chǎn)品名稱:去內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒 Free Endotoxin Plasmid Extraction Maxi Kit
英文名稱:Free Endotoxin Plasmid Extraction Maxi Kit
產(chǎn)品規(guī)格:10T
儲存條件:酶附件-20℃,內(nèi)毒素清除劑4℃,其它試劑RT,復(fù)檢期1年
去內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒 質(zhì)粒提取

NobleRyderD9938  去內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒 Free Endotoxin Plasmid Extraction Maxi Kit

 

去內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒 質(zhì)粒提取

產(chǎn)品貨號:D9938

產(chǎn)品名稱:去內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒 Free Endotoxin Plasmid Extraction Maxi Kit

英文名稱:Free Endotoxin Plasmid Extraction Maxi Kit

產(chǎn)品規(guī)格:10T

產(chǎn)品簡介:

儲存條件:酶附件-20℃,內(nèi)毒素清除劑4℃,其它試劑RT,復(fù)檢期1年

 

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)


 NobleRyderD9938  去內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒本試劑盒采用堿裂解法裂解細(xì)胞,根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的原理特異性提取質(zhì)粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA,可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機化合物。 Solarbio公司研制的內(nèi)毒素清除劑,可最大限度地除去內(nèi)毒素。從50-100ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中,可快速提取200-300μg高純度高拷貝的質(zhì)粒DNA,提取率達85-90%。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA純度高,可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染等要求較高的實驗,以及其他各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗。

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽(每瓶需單獨加入60mL 無水乙醇)。P1在使用前先加入RNase A(將試劑盒中提供的RNase A全部加入),混勻,置于2-8℃保存。如非指明,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

第一次開蓋使用后請將內(nèi)毒素清除試劑于2-8℃保存,可以縮短使用時的冰上預(yù)冷時間。

操作步驟(僅供參考):

1. 取50-100mL 細(xì)菌培養(yǎng)物,11000rpm離心1min,盡量吸除上清(菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中)。

2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入4mL P1(請先檢查是否已加入RNase A),使用移液器或旋渦振蕩器che底懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。注意:如菌塊未che底混勻,會影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。

3. 向離心管中加入4mL P2,溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解。注意:混勻一定要溫和,以免污染細(xì)菌基因組 DNA,此時菌液應(yīng)變得清亮粘稠,作用時間不要超過 5min,以免質(zhì)粒被破壞。

4. 向離心管中加入4mL P3,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次,充分混勻,此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。11000rpm 離心10min,用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個干凈的離心管中,盡量不要吸出沉淀。注意:P3加入后應(yīng)立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。

5. 加入上清1/5體積的冰上預(yù)冷內(nèi)毒素清除劑,振蕩混勻溶液變渾濁,冰浴5-10min至溶液變清亮。

6. 42℃水浴5min,不時振蕩,溶液又變渾濁,11000rpm室溫離心5min,溶液應(yīng)分為兩相,上層水相含質(zhì)粒DNA,下層油相含內(nèi)毒素。

7. 將含質(zhì)粒DNA的上層水相轉(zhuǎn)移至新管,棄下層油相,注意不要吸入油狀相。重復(fù)抽提三次,即重復(fù)步驟5-7三次。

8. 加入0.5 倍上清體積的無水乙醇,充分混勻后加入吸附柱(吸附柱加入收集管中),室溫放置2min,11000rpm 離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

9. 向吸附柱中加入7mL漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),11000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

10. 向吸附柱中加入7mL漂洗液,11000rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

11. 11000rpm 離心 2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗,如酶切、PCR等。

12. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加1-2mL經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置2min,11000rpm離心2min。

13. 為增加質(zhì)粒的回收效率,可將洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置2min,11000rpm離心2min。

注意事項:

1. 使用前請先檢查P2和P3是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復(fù)澄清后再使用。P2、P3、漂洗液使用后應(yīng)立即擰緊蓋子。

2. 洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于500μL,體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍),pH 值低于7.0會降低洗脫效率,DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。

3. 如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?;虼笥?10kb 的大質(zhì)粒,應(yīng)加大菌體使用量,使用 100-200mL過夜培養(yǎng)物,同時按照比例增加P1、P2和P3的用量,吸附和洗脫時可以適當(dāng)?shù)难娱L時間,以增加提取效率。

4. DNA 濃度及純度檢測:得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。得到的 DNA 可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/mL雙鏈DNA、40ug/mL單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響吸光值,但并不表示純度低。

 

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