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當前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>分子生物學>>質粒提取>> D9908革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 質粒提取
參 考 價 | 面議 |
產(chǎn)品型號D9908
品 牌NobleRyder/諾博萊德
廠商性質經(jīng)銷商
所 在 地北京市
更新時間:2025-03-17 14:08:55瀏覽次數(shù):34次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/100T |
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貨號 | D9908 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
主要用途 | 質粒提取 |
NobleRyderD9908 革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit
革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 質粒提取
產(chǎn)品貨號:D9908
產(chǎn)品名稱:革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit
英文名稱:Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit
產(chǎn)品規(guī)格:50T/100T
產(chǎn)品簡介:
儲存條件:酶附件-20℃,其它試劑RT,復檢期1年
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準
NobleRyderD9908 革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit產(chǎn)品內(nèi)容
注意:使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入),混勻,置于 2-8℃保存。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
操作步驟(僅供參考):
1. 取1-5 mL 細菌培養(yǎng)物,12000 rpm離心1 min,盡量吸除上清(菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中)。
2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入200 μL溶液Ⅰ(請先檢查是否已加入RNaseA),使用移液器或旋渦振蕩器che底懸浮細菌細胞沉淀。再向其中加入50μL溶jun酶,混勻,37℃水浴30 min以上(根據(jù)菌液量可適當加長水浴時間)。注意:如果菌塊未che底混勻,會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。如不能確定為何種菌,請按陽性菌處理。
3. 向離心管中加入250 μL溶液Ⅱ,溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解。注意:混勻一定要溫和,以免污染基因組DNA,此時菌液應變得清亮粘稠,作用時間不要超過5 min,以免質粒受到破壞。
4. 向離心管中加入350 μL溶液Ⅲ,立即溫和地上下翻轉6-8次,充分混勻,此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀,12000 rpm離心10 min 。注意:溶液Ⅲ加入后應立即混勻,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。
5. 取上一步上清,加入0.4倍體積無水乙醇,充分混勻。(體積過多可分兩次混合,然后上柱)。
6. 將上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中),室溫放置2 min,12000 rpm 離心1 min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中( 如果一次加不完,可分兩次吸附) 。
7. 向吸附柱中加入600μL漂洗液Ⅰ(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8. 向吸附柱中加入 700μL 漂洗液Ⅱ(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm 離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
9. 向吸附柱中加入500μL漂洗液Ⅱ,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
10. 12000rpm 離心 2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。
11. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200μL經(jīng)65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置2min,12000rpm離心1min。
12. (可選)為了增加質粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置 2min,12000rpm 離心1min。
注意事項:
1. 使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在 37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復澄清后再使用。
2. 洗脫緩沖液體積不應少于50 μL,體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右( 可用NaOH將水的pH值調至此范圍) ,pH 值低于7.0會降低洗脫效率。DNA產(chǎn)物應保存在-20℃,以防DNA降解。
3. 如果所提質粒為低拷貝質?;虼笥?0 kb的大質粒,應加大菌體使用量,使用5-10 mL過夜培養(yǎng)物,同時按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,吸附和洗脫時可以適當?shù)难娱L時間,以增加提取效率。
4. DNA 濃度及純度檢測:得到的質粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。得到的 DNA 可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當于大約50 μg/ mL雙鏈DNA、40 μg/ mL單鏈DNA。OD260/OD280比值應為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。
革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 質粒提取
產(chǎn)品訂購信息
D9908 革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit 50T
D1118 革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit 100T
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