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諾博萊德 細胞跨膜蛋白提取試劑盒

細胞跨膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：P4944

產(chǎn)品名稱：細胞跨膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：細胞跨膜蛋白提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder P4944 細胞跨膜蛋白提取試劑盒

動物跨膜蛋白承擔各種生物功能，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演重要角色?？缒さ鞍讟悠返闹苽湫枰浞挚紤]到與下游的膠分析及質譜分析等應用配套，因此跨膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰(zhàn)。細胞跨膜蛋白提取試劑盒是一種高效的高產(chǎn)跨膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從動物細胞和組織溫和、高效地抽提膜/跨膜蛋白和膜蛋白復合物。用本試劑盒抽提和富集到的蛋白包括從分子量很小到很大的蛋白，單次跨膜至7次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白復合物。提取過程簡單方便。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

適用樣本：動物細胞

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

動物跨膜蛋白承擔各種生物功能，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演重要角色?？缒さ鞍讟悠返闹苽湫枰浞挚紤]到與下游的膠分析及質譜分析等應用配套，因此跨膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰(zhàn)。

細胞跨膜蛋白提取試劑盒是一種高效的高產(chǎn)跨膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從動物細胞和組織溫和、高效地抽提膜/跨膜蛋白和膜蛋白復合物。用本試劑盒抽提和富集到的蛋白包括從分子量很小到很大的蛋白，單次跨膜至7次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白復合物。提取過程簡單方便。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點：

1、使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

2、提取過程簡單方便。

3、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

二、細胞跨膜蛋白提取

1. 提取液制備：

每 500ul 冷的蛋白提取液 A 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物和 2ul 磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

每 500ul 膜蛋白溶解液 C 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物和 2ul 磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

2．收集 5-10×10

6個以上細胞，在 4℃，500×g 條件下離心 2-3 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干。

3. 用冷 PBS 洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 細胞樣品中加入 200μl 冷的試劑 A，高速渦旋振蕩 5 秒，置 2-8℃振蕩 20 分鐘-1 小時。

5. 再次高速渦旋振蕩 5 秒，然后在 4℃，13000×g 條件下離心 5 分鐘。

6. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，37℃水浴 10 分鐘. 7. 在 37℃條件 500-2000×g 離心 3 分鐘，此時溶液分為兩層，下層是跨膜蛋白約為 20-40μl。

8. 小心移除上層。下層粘稠狀液體即為跨膜蛋白樣品。

9. 用 150-200μl 冰冷的試劑 B 稀釋下層跨膜蛋白，混勻后冰浴 2 分鐘，37℃水浴 10 分鐘，37℃條件下 2000×g 離心 3 分鐘，此時溶液分為兩層，下層是跨膜蛋白部分約為 20-40μl。

10. 按步驟 7 再次抽提下層(此步驟可以選做)。

11. 小心移除上層。用 50-200μl 冰冷的試劑 C 溶解下層，即得跨膜蛋白。

12. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?/span>

三、組織跨膜蛋白提取

1. 提取液制備：

每 500ul 冷的蛋白提取液 A 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物和 2ul 磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

每 500ul 膜蛋白溶解液 C 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物和 2ul 磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

2. 取 50-100 mg 組織樣本用手術jian刀盡可能剪碎，加入冷的蛋白提取液 A，用組織勻漿機/勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體，將勻漿吸入另一預冷的干凈離心管。

3. 按照細胞蛋白的提取方法的第 3 步驟往下操作即可。

常見問題分析：

1.蛋白濃度低？

膜蛋白豐度比較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大細胞的上樣量以提高膜蛋白濃度。

處理部分組織樣本時可能沒有裂解wan全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。

最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford 法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。

如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

4.膜蛋白電泳沒有條帶？

膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。

膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進行蛋白定量。

蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保溫30分鐘。

蛋白Loading buffer中SDS終濃度含量可以提高至3%-10%。

有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。

電泳時最好采用低電壓低電流電泳。

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗。

細胞跨膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品訂購信息：

P4944  細胞跨膜蛋白提取試劑盒  50T/100T