花青素還原酶（anthocyanidin reductase，ANR）試劑盒說明書

微量法 100T/96S

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

花青素還原酶是黃酮合成途徑中的關鍵酶，在植物體內起非常重要的調控作用，對花青素還原酶的調控機制研究有利于從基因水平改變植物的品質。

測定原理：

花青素還原酶在 NADPH 存在的條件下作用于飛燕草色素轉變?yōu)楸頉]食子兒茶素和NADP，使反應體系在 340nm 處的吸光值下降，吸光值下降速率反應了花青素還原酶的活性。

花青素還原酶試劑盒 抗氧系列-常備現貨

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加 1ml 蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加 1ml 蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加 1ml 蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

自備儀器和用品：

天平、研缽、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。

酶液提取:

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2. 培養(yǎng)液等液體：直接檢測。

測定操作表：

充分混勻，于微量石英比色皿/96 孔板測定 340 處吸光值A1，然后在 40℃溫育 20min 后，再測定 340nm

處吸光值A2，△A=A1-A2

酶活性計算公式:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1） 按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在 40℃，pH6.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 80.39×ΔA÷Cpr

（2） 按照樣本質量計算

酶活性定義：在 40℃，pH6.5 條件下，每克組織每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/g 鮮重）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T

= 80.39×ΔA÷W

（3） 按液體體積計算

酶活性定義：在 40℃，pH6.5 條件下，每毫升液體每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/ml）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T

= 80.39×ΔA

V 反總：反應體系總體積，0.2ml；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； V 樣：加入樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，20min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

（1） 按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在 40℃，pH6.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 160.78×ΔA÷Cpr

（2） 按照樣本質量計算

酶活性定義：在 40℃，pH6.5 條件下，每克組織每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/g 鮮重）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T

= 160.78×ΔA÷W

（3） 按液體體積計算

酶活性定義：在 40℃，pH6.5 條件下，每毫升液體每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/ml）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T

= 160.78×ΔA

V 反總：反應體系總體積，0.2ml；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm； V 樣：加入樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，20min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g

花青素還原酶試劑盒 抗氧系列-常備現貨