產品簡介：

本試劑盒用于環(huán)化單鏈 DNA。

產品特點：

1.即開即用，十分簡單方便，用戶不需要辛苦摸索條件。

2.ssDNA 的 5’必須有磷酸基團，3‘必須是羥基基團。

3.適用于長度在 20nt 以上的單鏈 DNA。

4.環(huán)化效率-最高可以達到 90%以上（ssDNA 越長，效率越低）。

5.本產品對 ssRNA 也有環(huán)化能力，故模板中不得有 RNA 污染。

6.所得單鏈環(huán)狀 DNA 可以用于 RCA 擴增。

7.本產品足夠 50 次 10uL 體系的 ssDNA 環(huán)化反應。

8.單鏈DNA環(huán)化試劑盒只能用于科研。

產品參數：

產品規(guī)格

保存和運輸

低溫運輸，-20℃保存,有效期為一年。

自備試劑

ssDNA 模板。

使用方法：

1.準備單鏈 DNA 模板：可以用自選的方法制備單鏈 DNA 模板，最-簡單的方式是直接人工合成單鏈 DNA，但必須將 5 端修飾為磷酸基團（合成 DNA 5 端的默認基團是-OH）。如果單鏈 DNA 來源于其他反應體系，則最好電泳回收（如尿素-PAGE電泳）以便去除其他成分對環(huán)化反應的干擾。為了方便后續(xù)克隆，可以在待突變  片段兩端設計成專一的、不存在于其他位置的限制性內切酶位點。

2.設置單鏈 DNA 環(huán)化反應，在 PCR 管中按下表加入各成分：

成分樣品管陰性對照

5 端磷酸化的單鏈 DNA

（終濃度為 10pmol/uL）5uL5uL

10×單鏈DNA 環(huán)化預混反應液A1uL1uL

20×單鏈DNA環(huán)化預混反應液B0.5uL0.5uL

25×單鏈 DNA 環(huán)化酶0.4uL

超純水3.1uL3.5uL

3.65℃保溫 1 小時。需要加熱蓋，否則反應體系中的水會蒸發(fā)。

4.如果需要去除沒有環(huán)化的單鏈 DNA，可以直接加入 10U 的 Exonuclease 37℃酶切 15 分鐘。本試劑不含相關成分。也可以加入本公司的線狀 DNA 清除劑（需要另購）。

5.90℃10 分鐘滅活反應體系。如果不能加熱，可以加入自備的 10mM EDTA。

選擇我們的單鏈DNA環(huán)化試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！