產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

LAMP 即 Loop-Mediated Isothermal Amplification（環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增），它利用 4 條模板專一的特異引物、和具有鏈置換能力的 Bst DNA 聚合酶 2.0

（8U/uL），在等溫條件下（65℃左右） 30-60 分鐘完成逆轉(zhuǎn)錄和 LAMP 擴(kuò)增。該技術(shù)在靈敏度、特異性和檢測(cè)范圍等指標(biāo)上能媲美甚至優(yōu)于定性 PCR 技術(shù)， 同時(shí)還不需要昂貴的儀器設(shè)備。目前已成功應(yīng)用于生物的快速檢測(cè)，廣泛用于各個(gè)領(lǐng)域。免提取 LAMP，即在傳統(tǒng) LAMP 技術(shù)的基礎(chǔ)上，免去 DNA 步驟。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.操作簡(jiǎn)單，只用一步（約 5-10 分鐘）即可以得到用于 LAMP 擴(kuò)增的模板。

2.即開(kāi)即用，含有紅色電泳示蹤劑，擴(kuò)增后可以直接上樣，不需要上樣液。

3.高特異性，精心優(yōu)化的配方，非特異擴(kuò)增比自配的試劑更低。

4.可以直接從幾乎所有的分子生物學(xué)樣品（包括細(xì)菌、真菌、植物、動(dòng)物、法醫(yī)樣品、石蠟組織切片等）中免提取 LAMP 擴(kuò)增。

5.65℃左右等溫?cái)U(kuò)增，不需要貴重儀器。

6.環(huán)保健康，不使用任何有毒有害的試劑。

7.本規(guī)格足夠處理 100 個(gè)樣本，足夠 50 次 20uL 體系的 LAMP 擴(kuò)增。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

成份規(guī)格包裝

廣譜 DNA 釋放劑5 mL5.0mL 綠蓋管

4×LAMP MasterMix

（含電泳示蹤劑，待加酶）200uL0.5mL 白蓋管

Bst DNA 聚合 2.0，8U/uL50uL0.5mL 紅蓋管

陽(yáng)性對(duì)照模板-引物混合物50uL0.5mL 藍(lán)蓋管

使用手冊(cè)1 份無(wú)

保存和運(yùn)輸

免提取 LAMP 試劑盒（電泳法）常溫運(yùn)輸，2-8 保存，有效期一年。

自備試劑

TE 緩沖液

使用方法：

一、LAMP 擴(kuò)增模板制備

注意：如果有 N 個(gè)樣品，最好設(shè)置 N+2 個(gè)樣品制備，多出的兩個(gè)：一個(gè)是樣品制備陽(yáng)性對(duì)照，一個(gè)是樣品制備陰性對(duì)照。

1.在 1.5mL 或 0.5mL 的塑料管中加入 50μL 廣譜 DNA 釋放劑。

2.再加入 2μL 液體樣品（如全血、細(xì)胞培養(yǎng)液等）或 2 mg（約半粒芝麻大?。?/p>

的固體樣品（如動(dòng)物組織、植物葉片等）。注意：固體樣品用量最好不要超過(guò) 1 mg/10μL 的比例，液體樣品用量最好不要超過(guò) 1μL /10μL 的比例。

3.對(duì)于液體樣品，室溫放置 3 分鐘；對(duì)于固定樣品 80℃加熱 5 分鐘；對(duì)難以破裂的樣品（如有厚壁的真菌、石蠟切片、血斑），則保溫時(shí)間可以延長(zhǎng)到 10 分鐘。得到的溶液稱為樣本裂解產(chǎn)物。

4.簡(jiǎn)短振蕩混勻后取樣品裂解產(chǎn)物立即取0.5uL 直接進(jìn)行20μL體系的LAMP擴(kuò)增或其他擴(kuò)增。注意：加入裂解產(chǎn)物體積不要超過(guò) LAMP 反應(yīng)體積的1/40。

二、LAMP 擴(kuò)增

5.配制 5×LAMP 引物混合液

先加超純水將合成的 HPLC 級(jí)別的下列引物干粉稀釋到下表所標(biāo)注的母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水， 最后得到 1mL 的 5×LAMP 引物混合液，此混合液足夠 250 次 20uL 體系的 LAMP 擴(kuò)增。如果需要配制的 5×LAMP 引物混合液體積異于 1mL，則各成分的用量請(qǐng)按比例調(diào)整。引物混合液可以在-20℃放置 2 年。

注：如果沒(méi)有Loop引物，則用超純水補(bǔ)足其體積。

6.在冰上融化 4×LAMP MasterMix（待加酶），混勻，稍離心。第一次使用時(shí)，請(qǐng)將 50uL Bst DNA 聚合酶 2.0(8U/uL)全部加入到 4×LAMP MasterMix 中并輕柔混勻至少 1 分鐘，然后再使用。如果有N 個(gè)樣品，則在N+2 個(gè)反應(yīng)管中加入以下組份，多出的一管是LAMP 擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照（PC），一管是 LAMP 擴(kuò)增陰性對(duì)照（NC）：

成份N+2 個(gè)樣品管LAMP

擴(kuò)增PCLAMP

擴(kuò)增 NC

4×LAMP MasterMix

（加酶后）5 uL5uL5 uL

自備的 5×LAMP 引物

混合液4 uL不加4 uL

陽(yáng)性對(duì)照模板-引物混合物不加4 uL不加

釋放的 DNA 模板0.5 uL不加不加

補(bǔ)自備超純水到20 uL20 uL20 uL

7.混勻，置于 65℃保溫 60 分鐘。如果是在 PCR 儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金屬浴或水浴保溫，沒(méi)有熱蓋，必須覆蓋 50uL 的自備石蠟油，否則保溫期間反應(yīng)體系的水分會(huì)蒸發(fā)，會(huì)嚴(yán)重影響反應(yīng)效率。

8.擴(kuò)增結(jié)束后取 5-10uL 擴(kuò)增產(chǎn)物直接上樣（本產(chǎn)品含有紅色電泳示蹤劑，不需要再加上樣液，紅色示蹤劑的泳動(dòng)速度相當(dāng)于 50bp 的 DNA）進(jìn)行 2-3% 的瓊脂糖凝膠電泳，有 LAMP 擴(kuò)增的樣品將可見(jiàn) LAMP 特征性 DNA 梯度電泳圖譜（見(jiàn)下圖）：

9.結(jié)果分析：如果本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照-引物混合物能夠擴(kuò)增而陰性對(duì)照不能擴(kuò)出，則實(shí)驗(yàn)有效。如果陽(yáng)性對(duì)照-引物混合物沒(méi)有擴(kuò)增出條帶，則試劑盒的問(wèn)題，請(qǐng)跟廠家聯(lián)系。如果陰性對(duì)照（水作為模板）有擴(kuò)增出條帶， 則說(shuō)明 LAMP 樣品或試劑有過(guò)去的擴(kuò)增產(chǎn)物的污染，需要注意操作的規(guī)范性，如果不能解決，可以重新設(shè)計(jì) LAMP 引物擴(kuò)增新的靶片段。

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