產品簡介：

動物線粒體 DNA（mtDNA）是進行分子進化研究和母性遺傳研究的重要材料，但傳統(tǒng)的兩步式動物 mtDNA 提取方法需要先溫和裂解動物細胞，分離線粒體，然后再從線粒體中提取mtDNA。此方法中的溫和裂解細胞的條件十分難以控制，需要針對不同組織材料單獨進行優(yōu)化，因此純化效果差異很大。

產品特點：

1.不需要單獨純化線粒體，操作簡單快捷。

2.得到的動物 mtDNA 只能用于 PCR 分析，不能用于其它實驗。

3.可以用于培養(yǎng)的動物細胞，實體動物組織和血液。每 1E7 個動物細胞一般能得到 100 ng 左右的mtDNA，每克實體動物組織一般能得到 1-2 ?g mtDNA。

4.本產品不能用于純化植物線粒體 DNA（需要另購）。

5.本試劑盒足夠 50 次微量提取。

6.動物線粒體DNA純化試劑盒（過柱法，PCR級）只可用于科研。

產品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

動物線粒體 DNA 純化溶液 A13 mL15 mL 本色瓶

動物線粒體 DNA 純化溶液 B13 mL15 mL 棕色瓶

動物線粒體 DNA 純化溶液 C18 mL30 mL 本色瓶

離心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

DNA 洗脫液（基因組純化用）

10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊1 份無

運輸及保存

待處理樣品，0.25%胰-酶消化液，PBS 緩沖液，1.5 mL 塑料離心管

自備試劑

常溫運輸與保存，有效期為 12 個月。

使用方法：

一、培養(yǎng)細胞的預先處理（本試劑盒不含相關試劑）

1.用自備的 0.25%胰-酶消化液處理約 1E7 個培養(yǎng)的動物細胞，離心收集后棄上清，保留細胞沉淀。

2.用PBS 緩沖液洗滌細胞沉淀兩次，最后得到的細胞沉淀將直接用作動物 mtDNA

提取的材料。

二、動物組織細胞預處理（本試劑盒不含相關試劑）

3.用剪刀將 1 g 新鮮的動物組織-剪碎（芝麻大小最好），轉移到 1.5 mL 塑料離心管中，直接用作動物 mtDNA 提取的材料。注意：不能使用凍存的動物組織，因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體膜和細胞膜刺破，其DNA 已經釋放出來， 被體液中的 DNA 酶降解。

三、血液預處理

4.將 3-5 mL 抗凝外周血靜置 30 分鐘或低速離心 5 分鐘，取白細胞層。

5.用自備 PBS 緩沖液洗滌白細胞兩次，得到的白細胞沉淀用于mtDNA 提取。四、線粒體粗提物制備

6.用自選方法將 1E7 個培養(yǎng)細胞或 1 g 實體組織勻漿。

7.室溫 700×g 離心 6 分鐘，收集上清。

8.將上清在室溫 10000×g 離心 10 分鐘，得線粒體粗提物沉淀。五、mtDNA 提取

9.在細胞沉淀或剪碎的組織或線粒體粗提物沉淀中加入 250 ?L 冰浴的動物線粒體

DNA 純化溶液 A，充分吹打分散。如果是剪碎的組織，不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

10.加入 250 ?L 常溫的動物線粒體 DNA 純化溶液 B（如果溶液B 有沉淀，用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），輕柔顛倒混勻 10 次，不要劇烈振蕩。

11.冰上放置 6-8 分鐘。注意不要超過 8 分鐘。

12.加入 350 ?L 冰浴的動物線粒體 DNA 純化溶液 C，輕柔顛倒混勻 6 次，可見白色沉淀物產生。冰上放置 20 分鐘。

13.室溫 13000×g 離心 10 分鐘，小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的 溶液比重較大，有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象，取上清時避開漂浮的沉淀即可。

14.靜置 5 分鐘以讓DNA 與離心吸附柱充分結合，此步十分重要。

15.室溫 13000×g 離心 1 分鐘，棄收集管中的廢液。

16.加入 500 ?L 的通用洗柱液，室溫 13000×g 離心 1 分鐘，棄收集管中廢液。

17.重復上步 1 次。

18.室溫 13000×g 離心 1 分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留通用洗柱液會影響DNA 的后續(xù)使用（如DNA 上樣時不能沉淀到加樣孔中）。

19.將離心吸附柱置于一個新的 1.5 mL 塑料離心管中，加入 50 ?L DNA 洗脫液（基因組純化用），室溫放置 2 分鐘。

20. 室溫 13000×g 離心 1 分鐘，離心管底溶液即mtDNA。每 1E7 個動物細胞一般能得到 100 ng 左右的 mtDNA，每克實體動物組織一般能得到 1-2 ?g 的 mtDNA。所得 DNA 量較少，不推薦使用 OD 檢測或電泳檢測的方式對所得DNA進行檢測。檢測如果 DNA 需要濃縮，可以使用本公司的核酸濃縮劑。本試劑盒

得到的 mtDNA 一般有斷裂，電泳時不呈現(xiàn)專一的帶，但不影響作為 PCR 模板。

選擇我們的動物線粒體DNA純化試劑盒（過柱法，PCR級），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！