產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是專門用于DNA 尿素-PAGE 變性電泳的試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.一站式，即開即用，用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分，十分方便。

2.安全，免去了實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。

3.可用于 DNA 測(cè)序、AFLP、DDRT、TGGE 和 RNase 保護(hù)實(shí)驗(yàn)等。

4.電泳后可直接用于銀染、EB 染色等實(shí)驗(yàn)。

5.本產(chǎn)品足夠 30 次 mini 尿素-PAGE 膠（10 cm×10 cm）實(shí)驗(yàn)。

6.DNA 尿素-PAGE變性電泳試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份 規(guī)格包裝材料

尿素 105 g×2250 mL 本色瓶

丙烯酰胺：甲叉雙丙烯酰胺

（29:1），電泳級(jí) 62 g250 mL 棕色瓶

TBE 電泳液，10× 250 mL250 mL 本色瓶

TEMED 1.5 mL2.0 mL 白蓋管

過硫酸銨 1 g2.0 mL 綠蓋管

使用手冊(cè) 1 份1 份

成份 規(guī)格包裝材料

2×尿素-PAGE 變性膠上樣液 1.5 mL2.0 mL 紅蓋管

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸，保存條件見上表，有效期一年。

自備試劑

去離子水

使用方法：

一、PAGE 濃度和交聯(lián)度的選擇指南

1.尿素-PAGE 變性膠一般使用 29：1（丙烯酰胺：甲叉雙丙烯酰胺）的交聯(lián)度，在此交聯(lián)度的條件下，DNA 片段長(zhǎng)度和最適 PAGE 濃度對(duì)應(yīng)關(guān)系如下：

二、制備尿素-PAGE 變性膠此處以配制 100 mL 尿素-PAGE 變性膠為例，如果配制體積不同，則各成分用量需要按比例調(diào)整。

2.新鮮配制 10%的 APS（過硫酸銨）：按每 0.1 克過硫酸銨干粉加 1 mL 去離子水的比例將水加到裝有硫酸銨干粉的 1.5 mL EP 管中，搖晃到粉末全部溶解。配制好的 10%的 APS 溶液可以在 4℃存放一周，超過一周必須棄之不用。

3.配制 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液（29：1，簡(jiǎn)稱 AB 溶液，下同）：在裝有丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺干粉的 250 mL 棕色塑料瓶中加入120 mL 自備的去離子水，顛倒搖晃溶解后，即得 40%的 AB 溶液。注意：丙烯酰胺單體溶液具有神經(jīng)毒性，一定要戴手套操作。

4.配尿素-PAGE 變性膠：在一個(gè)干凈的 250 mL 玻璃三角瓶中，按下表的用量加入各成分。注意：丙烯酰胺單體溶液具有神經(jīng)毒性，一定要戴手套  操作。

5.攪拌直到所有成分溶解，然后用濾紙過濾。

6.抽真空 10-15 分鐘以去除溶液中的氧氣，因?yàn)檠鯕饽芤种票０肪酆戏磻?yīng)。無條件抽真空也可以跳過此步。

7.加入 500 μL 10%APS 和 100 μL TEMED 后，迅速搖勻后灌膠。

8.在 PAGE 膠的液面距離達(dá)到頂部時(shí)停止灌膠，插入梳子。

9.室溫聚合 30-60 分鐘。不能放低溫，低溫會(huì)抑制聚合反應(yīng)。

10.拔出梳子，用 0.5×TEB 液沖洗加樣孔。三、DNA 樣品的準(zhǔn)備

11.對(duì)一般樣品、測(cè)序樣品、微衛(wèi)星 DNA、AFLP 樣品、DDRT 樣品、RPA樣品：將樣品跟 2×尿素-PAGE 上樣液 1:1 混合，95℃ 3 分鐘變性，然后放冰上待用。

12.對(duì) TGGE 樣品：可以不加上樣液直接放冰上待用。四：電泳

13.將凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽中加入足夠 0.5×TEB 電泳液。

14.預(yù)電泳 30 分鐘，使得 PAGE 膠發(fā)熱后，將冰上放置的樣品上樣。

15.連接電源線，打開電源開關(guān)。根據(jù)膠的大小選擇固定功率進(jìn)行電泳。固定  功率等于固定產(chǎn)熱，這樣就不容易發(fā)生過熱而發(fā)生 PAGE 膠板破裂的現(xiàn)象。如果固定電流或電壓，產(chǎn)熱將隨電泳時(shí)間而變化，不好控制。對(duì)小膠一般用 5-6W 的固定功率，大膠用 15-25W 的固定功率。

16.終止電泳，取出凝膠進(jìn)行后續(xù)的處理（如銀染）。注意：如果銀染，必須延長(zhǎng)固定時(shí)間以便讓洗出尿素，否則膠中殘留的尿素會(huì)嚴(yán)重干擾后面的銀染。

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