產(chǎn)品簡介：

基因組 DNA（gDNA）污染是 RNA 樣品中普遍存在的現(xiàn)象。由于污染的gDNA 也會作為后續(xù)PCR 的模板，因此會嚴(yán)重干擾后續(xù) RT-PCR 的效率和準(zhǔn)確性，尤其是定量RT-PCR。目前的去gDNA 污染的方法主要是用RNase-free DNase 法降解RNA樣品中的 gDNA，滅活 DNase 后，然后再進(jìn)行 RT 反應(yīng)。此方法分兩步進(jìn)行，十分不便。為了克服上述方法的缺點(diǎn)，本公司開發(fā)出了本產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.一管式去除 gDNA，跟 RT-PCR 反應(yīng)的設(shè)置同步進(jìn)行。

2.高效，可以使樣品中殘留的 gDNA 污染（ng 級）降低到 PCR 檢測不到的水平。

3.跟PCR 和熒光定量PCR 兼容，包括基于古細(xì)菌DNA 聚合酶的PCR（如Pfu DNA

聚合酶，多為高保真酶）。

4.本試劑盒所用的 MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶為 RNase H 缺失突變，故合成 cDNA 片段長度可達(dá) 12 kb。還能用于 GC 含量高，二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA 模板。

5.本產(chǎn)品規(guī)格足夠 50 次 20uL 體系的 RT 反應(yīng)。

6.除 gDNA RT 試劑盒只用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

5×RT Buffer200uL0.5mL 綠蓋管

抗污染 MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶50uL0.5mL 紅蓋管

隨機(jī)引物(0.2 ug/uL)50 uL0.5mL 黃蓋管

10mM dNTP20 uL0.5mL 藍(lán)蓋管

使用手冊1 份無

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存, 有效期一年。

自備試劑

RNA 模板。

使用方法：

1.在一個干凈的無 RNase 反應(yīng)管管中加入 RNA 模板，不超過 13uL。RNA 模板種類加入量

總 RNA100-500 ng

或 poly(A) mRNA10-500 ng

或?qū)Ｒ坏?RNA0.01 pg-500 ng

2.加入 4 uL 4×RT Buffer。

3.再加入 1 uL 抗污染 MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶。常溫放置 30 分鐘去除gDNA。

4.按下表加入引物：

引物種類加入量

或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL)1 uL

或 RNA 模板專一性引物1 uL（20 pmol）

注意：隨機(jī)引物與 RNA 模板的比例跟 cDNA 合

成的平均長度成反比。

5.加入 1uL 10mM each 的dNTP。加入引物和dNTP 后必須馬上進(jìn)入后續(xù)操作， 不要放置。

6.最后補(bǔ)水使得總體積為 20uL。

7.37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。但如果使用隨機(jī)引物，由于其很短，則改成 25℃ 5 分鐘以便其跟 RNA 結(jié)合。

8.42℃保溫 60 分鐘。但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，待合成了一段 cDNA 后，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。

9.70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，不需要純化。

10.輕輕吹打混勻，短暫離心，37℃保溫 60 分鐘進(jìn)行抗污染逆轉(zhuǎn)錄。

11.95℃10 分鐘加熱滅活相關(guān)酶，短暫離心，直接作為模板用于后續(xù)常規(guī) PCR、染料法 qPCR 或探針法 qPCR 實驗，或者長期放-20℃待用。用于后續(xù) PCR 時，

一般使用量不超過終體積的 1/10，具體需要根據(jù)各廠家的PCR 試劑盒確定。

選擇我們的除 gDNA RT 試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護(hù)航！