產(chǎn)品簡介：

本試劑盒用于從革蘭氏陽性（G+）細菌中小量制備質(zhì)粒 DNA。本產(chǎn)品是經(jīng)過精心改良后的堿變性法質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒，其原理是菌體經(jīng)溶菌-酶破壁， 將破壁后的菌體用堿使基因組 DNA 和質(zhì)粒 DNA 全部變性，經(jīng)酸中和后的質(zhì)粒DNA 可以快速復性，基因組 DNA 不能快速復性，通過離心可有效去除基因組DNA。除去基因組 DNA 后的含質(zhì)粒 DNA 的上清用離心吸附柱吸附質(zhì)粒 DNA， 洗去雜質(zhì)，即可得到純化的質(zhì)粒 DNA。

產(chǎn)品特點：

1.簡單快捷，整個實驗在 40 分鐘左右完成。

2.不需要預平衡離心吸附柱。

3.通用洗柱液即開即用，不需要用戶額外加乙醇。

4.溶液 B 中有藍色染料，便于目測非常關鍵的堿變性和中和反應兩步的溶液混勻狀況，保證實驗效果。

5.產(chǎn)量高，一次可以處理 1-4mL 過夜培養(yǎng)的 G+菌液，每毫升過夜培養(yǎng)的 G+細菌可以提取到 2-5μg/mL，純化后質(zhì)粒 DNA 的濃度取決于質(zhì)粒的拷貝數(shù)

6.純度高，采用本試劑盒提取的質(zhì)粒 OD 比值在 1.8-2.0 之間，可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測序及 PCR 等。

7.本產(chǎn)品足夠 50 次微量提取。

8.革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒DNA純化試劑盒(過柱法)只可用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒 DNA

純化溶液 A13 mL15 mL 本色瓶

革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒 DNA

純化溶液 B13 mL15 mL 棕色瓶

革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒 DNA 純化溶液 C18 mL30 mL 本色瓶

溶菌-酶干粉（20KU/mg）250 mg2.0 mL 黃蓋管

RNase A 溶液，10mg/mL0.6 mL2.0 mL 本蓋管

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

DNA 洗脫液

（基因組 DNA 專用）10 mL10 mL 本色瓶

離心吸附柱50 套塑料袋

使用手冊1 份無

運輸及保存

常溫運輸和保存，RNase A 溶液需要-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

1.5 mL 塑料離心管。

使用方法：

1.從篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng) 12-16 小時

（搖床轉(zhuǎn)速 200-300）。注意：建議使用 LB 培養(yǎng)基，營養(yǎng)更豐富的培養(yǎng)基會使菌體濃度過高，超過純化系統(tǒng)的處理能力而降低質(zhì)粒 DNA 的質(zhì)量。另外，延長培養(yǎng)時間會因細胞死亡、裂解而造成質(zhì)粒 DNA 濃度降低。

2.用 1.5mL 離心管收集 1-4mL 過夜培養(yǎng)飽和菌液，室溫 12,000rpm 離心 1分鐘，棄上清，再短暫離心，吸棄殘留液體。

3.第一次使用本試劑盒時，先將本試劑盒提供的全部 RNase A 溶液加入到革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒 DNA 純化溶液 A（簡稱溶液 A，下同）中，搖勻后再取用， 未用完的溶液 A 放 4℃保存。

4.加入 250μL 溶液 A 到第 2 步得到的細菌沉淀中，用槍頭充分吹打使菌體重懸。注意：細胞未充分懸浮會影響后續(xù)堿變性，可以使用漩渦振蕩器混勻或使用槍頭吸頭吹打沉淀至完-全混勻。

5.加入大約 5mg 溶菌-酶干粉到細菌懸液中（用 0.1mg 精度的分析天平稱量），輕柔顛倒混勻后室溫放置 10 分鐘破裂細胞壁。

6.加入 250μL 革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒 DNA 純化溶液 B（下面簡稱溶液 B，如果溶液 B 在低溫放置產(chǎn)生沉淀，須 37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用）， 溫和顛倒 4-6 次混勻，藍色將變得均勻并且溶液將變得粘稠。注意：千萬不要劇烈振蕩，否則基因組 DNA 斷裂產(chǎn)生的片段非常容易污染質(zhì)粒 DNA。溶液 B 用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會進入溶液，形成碳酸， 中和溶液 B 中的堿，降低其效率。如果溶液 B 顏色不是藍色，則表示變質(zhì)， 應該棄之不用并且跟廠家聯(lián)系。

7.冰上放置不超過 5 分鐘。注意：冰上放置不要超過 5 分鐘，否則質(zhì)粒 DNA 會有堿損傷。

8.加入 350μL 冰上預冷的革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒 DNA 純化溶液 C（下面簡稱溶液 C），溫和反復顛倒 4-6 次，溶液將變成無色，將有白色絮狀沉淀產(chǎn)生。

9.冰上放置至少 5 分鐘讓質(zhì)粒 DNA 復性。不能短于 5 分鐘，一般 10 分鐘。

10.12,000rpm 離心 3 分鐘，小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大，部分絮狀物懸浮在上清液中屬正常現(xiàn)象，吸取上清時避開這些懸浮物即可。如果此步的離心在 4℃進行，可減輕沉淀物漂浮。

11.靜置 2 分鐘以讓質(zhì)粒 DNA 與離心吸附柱充分結(jié)合。

12.室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘，棄收集管中的廢液。

13.加入 500μL 的通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘，棄收集管中廢液。注意：通用洗柱液中含乙醇，每次用后需要將蓋擰緊存放， 否則乙醇會揮發(fā)。

14.重復上步 1 次。

15.室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會影響 DNA 的后續(xù)使用（如殘留乙醇使 DNA 溶液在電泳上樣時不能沉淀到加樣孔中）。

16.將離心吸附柱置于一個新的 1.5mL 塑料離心管中，加入 30-100μL 65-80℃預熱的 DNA 洗脫液（基因組 DNA 專用），室溫放置 2 分鐘。

17.室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘，離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA 溶液。

選擇我們的革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒DNA純化試劑盒(過柱法)，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！