目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學試劑>>試劑盒>> 革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒DNA純化試劑盒(過柱法)
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50次 |
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貨號 | XY-D-1828 | 應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Gram-positive Bacteria Plasmid DNA Purification Ki |
保存條件 | -20℃ | 有效期 | 1年 |
產(chǎn)品簡介:
本試劑盒用于從革蘭氏陽性(G+)細菌中小量制備質(zhì)粒 DNA。本產(chǎn)品是經(jīng)過精心改良后的堿變性法質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒,其原理是菌體經(jīng)溶菌-酶破壁, 將破壁后的菌體用堿使基因組 DNA 和質(zhì)粒 DNA 全部變性,經(jīng)酸中和后的質(zhì)粒DNA 可以快速復性,基因組 DNA 不能快速復性,通過離心可有效去除基因組DNA。除去基因組 DNA 后的含質(zhì)粒 DNA 的上清用離心吸附柱吸附質(zhì)粒 DNA, 洗去雜質(zhì),即可得到純化的質(zhì)粒 DNA。
產(chǎn)品特點:
1.簡單快捷,整個實驗在 40 分鐘左右完成。
2.不需要預平衡離心吸附柱。
3.通用洗柱液即開即用,不需要用戶額外加乙醇。
4.溶液 B 中有藍色染料,便于目測非常關鍵的堿變性和中和反應兩步的溶液混勻狀況,保證實驗效果。
5.產(chǎn)量高,一次可以處理 1-4mL 過夜培養(yǎng)的 G+菌液,每毫升過夜培養(yǎng)的 G+細菌可以提取到 2-5μg/mL,純化后質(zhì)粒 DNA 的濃度取決于質(zhì)粒的拷貝數(shù)
6.純度高,采用本試劑盒提取的質(zhì)粒 OD 比值在 1.8-2.0 之間,可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測序及 PCR 等。
7.本產(chǎn)品足夠 50 次微量提取。
8.革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒DNA純化試劑盒(過柱法)只可用于科研。
產(chǎn)品參數(shù):
成分規(guī)格包裝
革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒 DNA
純化溶液 A13 mL15 mL 本色瓶
革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒 DNA
純化溶液 B13 mL15 mL 棕色瓶
革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒 DNA 純化溶液 C18 mL30 mL 本色瓶
溶菌-酶干粉(20KU/mg)250 mg2.0 mL 黃蓋管
RNase A 溶液,10mg/mL0.6 mL2.0 mL 本蓋管
通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶
DNA 洗脫液
(基因組 DNA 專用)10 mL10 mL 本色瓶
離心吸附柱50 套塑料袋
使用手冊1 份無
運輸及保存
常溫運輸和保存,RNase A 溶液需要-20℃保存,有效期一年。
自備試劑
1.5 mL 塑料離心管。
使用方法:
1.從篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養(yǎng)基中,37℃震蕩培養(yǎng) 12-16 小時
(搖床轉(zhuǎn)速 200-300)。注意:建議使用 LB 培養(yǎng)基,營養(yǎng)更豐富的培養(yǎng)基會使菌體濃度過高,超過純化系統(tǒng)的處理能力而降低質(zhì)粒 DNA 的質(zhì)量。另外,延長培養(yǎng)時間會因細胞死亡、裂解而造成質(zhì)粒 DNA 濃度降低。
2.用 1.5mL 離心管收集 1-4mL 過夜培養(yǎng)飽和菌液,室溫 12,000rpm 離心 1分鐘,棄上清,再短暫離心,吸棄殘留液體。
3.第一次使用本試劑盒時,先將本試劑盒提供的全部 RNase A 溶液加入到革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒 DNA 純化溶液 A(簡稱溶液 A,下同)中,搖勻后再取用, 未用完的溶液 A 放 4℃保存。
4.加入 250μL 溶液 A 到第 2 步得到的細菌沉淀中,用槍頭充分吹打使菌體重懸。注意:細胞未充分懸浮會影響后續(xù)堿變性,可以使用漩渦振蕩器混勻或使用槍頭吸頭吹打沉淀至完-全混勻。
5.加入大約 5mg 溶菌-酶干粉到細菌懸液中(用 0.1mg 精度的分析天平稱量),輕柔顛倒混勻后室溫放置 10 分鐘破裂細胞壁。
6.加入 250μL 革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒 DNA 純化溶液 B(下面簡稱溶液 B,如果溶液 B 在低溫放置產(chǎn)生沉淀,須 37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用), 溫和顛倒 4-6 次混勻,藍色將變得均勻并且溶液將變得粘稠。注意:千萬不要劇烈振蕩,否則基因組 DNA 斷裂產(chǎn)生的片段非常容易污染質(zhì)粒 DNA。溶液 B 用后需要將蓋擰緊存放,否則空氣中的二氧化碳會進入溶液,形成碳酸, 中和溶液 B 中的堿,降低其效率。如果溶液 B 顏色不是藍色,則表示變質(zhì), 應該棄之不用并且跟廠家聯(lián)系。
7.冰上放置不超過 5 分鐘。注意:冰上放置不要超過 5 分鐘,否則質(zhì)粒 DNA 會有堿損傷。
8.加入 350μL 冰上預冷的革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒 DNA 純化溶液 C(下面簡稱溶液 C),溫和反復顛倒 4-6 次,溶液將變成無色,將有白色絮狀沉淀產(chǎn)生。
9.冰上放置至少 5 分鐘讓質(zhì)粒 DNA 復性。不能短于 5 分鐘,一般 10 分鐘。
10.12,000rpm 離心 3 分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,部分絮狀物懸浮在上清液中屬正常現(xiàn)象,吸取上清時避開這些懸浮物即可。如果此步的離心在 4℃進行,可減輕沉淀物漂浮。
11.靜置 2 分鐘以讓質(zhì)粒 DNA 與離心吸附柱充分結(jié)合。
12.室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘,棄收集管中的廢液。
13.加入 500μL 的通用洗柱液到離心吸附柱中,室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘,棄收集管中廢液。注意:通用洗柱液中含乙醇,每次用后需要將蓋擰緊存放, 否則乙醇會揮發(fā)。
14.重復上步 1 次。
15.室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響 DNA 的后續(xù)使用(如殘留乙醇使 DNA 溶液在電泳上樣時不能沉淀到加樣孔中)。
16.將離心吸附柱置于一個新的 1.5mL 塑料離心管中,加入 30-100μL 65-80℃預熱的 DNA 洗脫液(基因組 DNA 專用),室溫放置 2 分鐘。
17.室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘,離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA 溶液。
選擇我們的革蘭氏陽性細菌質(zhì)粒DNA純化試劑盒(過柱法),就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護航!