產(chǎn)品簡介：

鈣黃綠素（Calcein）的 CAS 號為 1461-15-0，其分子結(jié)構(gòu)式如下：

鈣黃綠素可用作 LAMP 可見光染料，其原理是在有Mn 離子存在的 LAMP 擴(kuò)增體系，如果沒有 LAMP 核酸擴(kuò)增發(fā)生，Mn 離子和鈣黃綠素結(jié)合，在紫外照射時不發(fā)熒光。如果有 LAMP 核酸擴(kuò)增發(fā)生，則 DNA 合成時將產(chǎn)生大量焦磷酸，這些焦磷酸將優(yōu)先跟 Mn2+結(jié)合，鈣黃綠素則跟體系中多余的Mg2+結(jié)合，在紫外照射時將發(fā)熒光。標(biāo)準(zhǔn) LAMP 反應(yīng)中的鎂離子濃度通常在 4-10mM 之間（跟引物濃度， dNTP 濃度相關(guān)）。其原理圖如下：

產(chǎn)品特點：

1. 即開即用，含有 Mn 離子，可以直接加入到含 Mn 的 LAMP 擴(kuò)增體系中。

2.其最佳用量根據(jù) LAMP 體系不同需要用戶自己優(yōu)化，但一般需要終濃度為 0.5 mM 的 Mn 離子，Mg 離子終濃度跟標(biāo)準(zhǔn) LAMP 反應(yīng)的Mg 離子濃度一樣。

3.本產(chǎn)品足夠 1000 次左右的 20 μL 體系的 LAMP 反應(yīng)。

4.LAMP 專用鈣黃綠素溶液，20×只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

LAMP 專用鈣黃綠素溶液，1 mL2 mL 棕色管

使用手冊1 份1 份

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

無

使用方法：

1.將本產(chǎn)品放置在室溫融化 30 分鐘，震蕩 10 秒鐘，短暫離心后放冰上待用。

2.按下表設(shè)置 20 μL 體系的 LAMP 反應(yīng)：

成份樣品管陰性對照

4×LAMP Mix5 μL        5 μL

自備 FIP 引物終濃度0.8 μM0.8 μM

自備 BIP 引物終濃度0.8 μM0.8 μM

自備 F3 引物終濃度0.2 μM     0.2 μM

自備 B3 引物終濃度0.2 μM     0.2 μM自備 Loop F 引物終濃度（可選項）     0.4 μM     0.4 μM自備 Loop B 引物終濃度（可選項）     0.4 μM     0.4 μM

自備模板 DNA1-100ng    不 加

Bst DNA 聚合酶(8 U/μL)1.5 μL1.5 μL MnCl2 溶液，5 mM2 μL2 μL

本產(chǎn)品1μL1μL

補(bǔ)水到20 μL20 μL

3.65℃保溫 1 小時。

4.LAMP 擴(kuò)增后在紫外燈下檢測，有核酸擴(kuò)增的將發(fā)熒光，管中液體顏色為黃綠色。沒有擴(kuò)增的將不發(fā)熒光，管中液體顏色為橘黃色。典型的實驗結(jié)果如下（左邊的有擴(kuò)增，黃綠色。右邊的沒有擴(kuò)增，溶液顏色為橘黃色）：

5.也可以電泳檢測實驗結(jié)果（強(qiáng)烈不推薦此法，因為電泳時產(chǎn)生的氣溶膠非常容易污染環(huán)境，使得今后用同一引物擴(kuò)增時產(chǎn)生假陽性）：取 5-10 μL 擴(kuò)增產(chǎn)物和自備的上樣液混合，上樣，進(jìn)行 2-3%的瓊脂糖凝膠電泳，有 LAMP 擴(kuò)增的樣品將可見 LAMP 特征性電泳圖譜。

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