產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

羥基萘酚藍(lán)（Hydroxy Naphthol Blue，HNB）的 CAS 號(hào)為 165660-27-5，其分子結(jié)構(gòu)式如下：

羥基萘酚藍(lán)(HNB)是一種金屬離子指示劑,LAMP-HNB 的變色原理為:HNB 與鎂離子結(jié)合使得反應(yīng)體系初始顏色為紫羅蘭色,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,鎂離子與析出的焦磷酸根離子反應(yīng)生成焦磷酸鎂沉淀,羥基萘酚藍(lán)失去了鎂離子使得體系顏色變?yōu)樘焖{(lán)色,而未反應(yīng)的體系則仍保持著紫羅蘭色。另外,HNB 可以在 LAMP 反應(yīng)前加入,有效的減少了反應(yīng)污染的可能性。本產(chǎn)品就是專(zhuān)門(mén)用于 LAMP 擴(kuò)增的羥基萘酚藍(lán)溶液，其濃度為 12 mM。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開(kāi)即用，可以直接加入到含 Mg 的 LAMP 擴(kuò)增體系中使用。

2.本產(chǎn)品的最佳用量根據(jù) LAMP 體系不同需要用戶自己優(yōu)先選擇，但一般終濃度為 25 ?M 左右， 需要終濃度為 0.5 mM 的 Mg 離子存在，并且 Mg 離子濃度跟標(biāo)準(zhǔn) LAMP 反應(yīng)的 Mg 離子濃度一樣。

3.本產(chǎn)品只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

LAMP 專(zhuān)用羥基萘酚藍(lán)溶液，12mM

1 mL1.5 mL 棕色管

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

無(wú)

使用方法：

1.將本產(chǎn)品放置在室溫融化 30 分鐘，震蕩 10 秒鐘，短暫離心后放冰上待用。

2.按下表設(shè)置 20 ?L 體系的 LAMP 反應(yīng)：

成份樣品管陰性對(duì)照

4×LAMP Mix5?L5?L

自備 FIP 引物終濃度0.8 ?M0.8 ?M

自備 BIP 引物終濃度0.8 ?M0.8 ?M

自備 F3 引物終濃度0.2 ?M0.2 ?M

自備 B3 引物終濃度0.2 ?M0.2 ?M

自備 Loop F 引物終濃度（可選項(xiàng)）0.4 ?M0.4 ?M

自備 Loop B 引物終濃度（可選項(xiàng)）0.4 ?M0.4 ?M

自備模板 DNA1-100ng不加

Bst DNA 聚合酶(8U/?L)1.5 ?L1.5 ?L

自備 MgCl2 溶液，5 mM2 ?L2 ?L

加本產(chǎn)品到終濃度25 ??左右25 ??左右

補(bǔ)水到20 ?L20 ?L

3.65℃保溫 1 小時(shí)。

4.LAMP 擴(kuò)增后用肉眼觀察，有核酸擴(kuò)增的將變色，管中液體顏色由紫羅蘭色變?yōu)樘焖{(lán)色。沒(méi)有擴(kuò)增的將不變色，管中液體顏色仍為紫羅蘭色。典型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖（左邊為陰性結(jié)果，右邊為陽(yáng)性結(jié)果）：

5.也可以電泳檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（強(qiáng)烈不推薦此法，因?yàn)殡娪緯r(shí)產(chǎn)生的氣溶膠非常容易污染環(huán)境，使得今后用同一引物擴(kuò)增時(shí)產(chǎn)生假陽(yáng)性）：取 5-10 ?L 擴(kuò)增產(chǎn)物和自備的上樣液混合，上樣，進(jìn)行 2-3%的瓊脂糖凝膠電泳，有 LAMP擴(kuò)增的樣品將可見(jiàn) LAMP 特征性電泳圖譜。

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